کلونینگ ناحیه کد کننده پروتئین غیرساختاری 3ab ویروس بیماری تب برفکی سروتایپ oایران
چکیده
بیماری تب برفکی یکی از بیماری های ویروسی و به شدت مسری در بین حیوانات اهلی بخصوص زوج سمان می باشد که هر ساله خسارات اقتصادی فراوانی به صنعت دامپروری کشور وارد می کند. این بیماری در کشور ایران از طریق واکسیناسیون و قرنطینه حیوانات بیمار کنترل می شود. به منظور کنترل مناسب و موثر شیوع بیماری تب برفکی، تست های تشخیصی مختلفی که قادر به شناسایی حیوانات آلوده از واکسینه شده هستند، توسعه یافته اند. در حال حاضر تشخیص آنتی بادی های پروتئین-های غیرساختاری به ویژه پلی پپتید غیرساختاری 3ab مطمئن ترین روش برای تشخیص حیوانات آلوده از واکسینه می باشد. هدف از انجام این پژوهش تعیین توالی نوکلئوتیدی ژن کد کننده ناحیه 3ab ویروس بیماری تب برفکی به منظور استفاده از آن برای تولید کیت های تشخیصی در تحقیقات آینده می باشد. در این مطالعه، سروتایپ o ویروس بیماری تب برفکی از موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی شعبه شمال شرق تهیه گردید. این ویروس در سال 2010 از نمونه های دام مشکوک به بیماری تب برفکی در استان خراسان رضوی جدا شد و توسط آزمایش های ساندویج الایزای غیرمستقیم و rt-pcr مورد تشخیص قرار گرفت و سروتایپ آن تعیین گردید. rna ویروسی از ویروس تخلیص گردید و واکنشrt-pcr با هدف جداسازی و تکثیر قطعه 672 جفت بازی ناحیه ژنی 3ab انجام پذیرفت. محصول pcr خالص سازی شد و در داخل وکتور ptz57r/t کلون گردید. پلاسمیدهای حاوی قطعه ژنی مورد نظر، تخلیص شدند و با استفاده از روش های کلونی pcr و joined pcr مورد تأیید قرار گرفتند.