ساخت نانو ذره فاژی نوترکیب نمایش دهنده می موتوپ برتر گیرنده فاکتور رشد اپیدرمی روی پروتئین 8 و بررسی آنتی بادی های تولید شده
چکیده
در این مطالعه با استفاده از فن آوری نمایش فاژی نانوذرات شبه فاژی نمایش دهنده می موتوپ برتر egfr ساخته شده است. در این سیستم، توسط وکتور فاژمیدی pak8-gvo77، پپتید مورد نظر روی pviii نانوذرات شبه فاژی به نمایش درآمد. توالی می موتوپ در مراحل قبلی با استفاده از فن آوری نمایش فاژی به دست آمده بود و برهمکنش آن با icr62 اثبات شده بود. این توالی پپتیدی به همراه لینکر 3 اسید آمینه ای (g-g-s) به توالی dna ترجمه معکوس و برای بیان در e.coli بهینه شد. با توجه به نقشه وکتور دو جایگاه برش آنزیمی در آن قرار داده شد. سپس توالی حاصل با طول نهایی 80 باز و پرایمرهای آن سنتز شدند. با روش pcr قطعه dna تکثیر و با استفاده از آنزیم های sfi1/not1، هضم دو گانه آنزیمی انجام شد. بدین ترتیب طول قطعه کلون شونده به 52 جفت باز کاهش یافت. این قطعه کوتاه dna داخل pak8-gvo77 کلون و محصول به e.coli tg1 ترانسفورم شد. کلونی pcr، pcr با استفاده از فاژمید تخلیص شده، تست تعیین توالی و یک هضم دو گانه آنزیمی دیگر با استفاده از sfi1/not1 روند کلونینگ، و با انجام تست الایزای فاژ با استفاده از آنتی بادی منوکلونال icr62 صحت نمایش پپتید تایید شد. سپس نانوذرات شبه فاژی نمایش دهنده می موتوپ egfr با استفاده از peg6000 تخلیص شده و غلظت آنها با روش رقت سازی متوالی تعیین شد. 1012 نانوذره شبه فاژی در 150 میکرولیتر بافر pbs تهیه و به موش های ماده به روش زیر پوستی و بدون ادجوونت تزریق شد. پس از خونگیری از موش ها و جداسازی سرم آنها تست الایزا انجام شد و نتایج نشان دادند که آنتی بادی علیه می موتوپ تولید شده است