ساخت وکتور مناسب برای بیان ژن igf-1انسان در باکتری
چکیده
امروزه بیماری دیابت برای سلامت جهانی یک تهدید جدی محسوب می شود. پروتئین igf-1 یکی از پروتئینهای مهم انسانی است که نقش اساسی در درمان بسیاری از بیماریها از قبیل دیابت، پوکی استخوان، چاقی، اختلالات عصبی و عضلانی و غیره ایفا میکند. باکتری e. coli به خاطر رشد سریع، تولید بیوماس بالا و هزینه ی کم به صورت گسترده به عنوان میزبان برای تولید پروتئین های نوترکیب استفاده می شود. هدف از این تحقیق، طراحی و ساخت وکتور مناسب جهت بیان ژن (igf-1) insulin-like growth factor1 جداسازی شده از سلولهای انسانی در باکتری e. coli می باشد. در مرحله نخست، dnaی ژن igf-1 با تکنیک pcr با استفاده از آغازگر های اختصاصی تکثیر یافته سپس الکتروفورز محصول pcr بر روی ژل آگارز، قطعه تکثیر شده به طولbp 336 را تایید کرد. ژن igf-1 و پلاسمید pgbkt7 با آنزیم های bamhi و ecori برش داده شدند و پس از خالص سازی، لیگاسیون بین آنها صورت گرفت. محصول لیگاسیون با روش الکتروپوراسیون به باکتری e. coli انتقال یافت. پس از گزینش باکتری های حاوی پلاسمید نوترکیب pgbkt7+igf-1 به کمک pcr استخراج پلاسمید از آنها صورت گرفته و پلاسمید های نوترکیب pgbkt7+igf-1 نهایتا با روش برش آنزیمی و سپس با توالی یابی تایید شدند. آنگاه ژن igf-1 با آنزیم های bamhi و ecori جداسازی و در وکتور pet-21a برش یافته با همان آنزیم ها لیگاسیون شد. پلاسمید های نوترکیب pet-21a+igf-1 با روش های pcr و برش آنزیمی تایید شدند. در نهایت وکتور نوترکیب pet-21a+igf-1 جهت بیان پروتئین igf-1 انسانی در سویه مناسب باکتری e. coli مورد استفاده قرار گرفت. پلاسمید حاصله در تولید پروتئین نوترکیب کاربرد خواهد داشت که در نهایت می تواند به عنوان یک منبع داروی زیستی در اختیار بیماران دیابتی قرار گیرد.