تکثیر و همسانه سازی ژن کشنده آلفا-توکسین (α-toxin) باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس تیپ d در باکتری e. coli
چکیده
باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس تیپ a یک تولید کننده سم آلفا¬توکسین می باشد که عامل ایجاد بیماری گازگانگرن است. این بیماری یک عفونت تهدید کننده حیات با تب، درد، ورم میکرونکروز و تولید گاز می باشد. پروتئین آلفا توکسین دارای فعالیت های فسفولیپازی و اسفنگولیومینازی می باشد که همولیز، مرگ و نکروز پوستی را سبب می شود. اثر کشندگی آلفا توکسین نیز به خاطر تخریب غشای سلولی می باشد به همین جهت این سم نقش مهمی در ایجاد قانقاریای گازی دارد. هدف از انجام این پژوهش، تکثیر و همسانه سازی ژن کشنده آلفا¬توکسین(α-toxin) باکتری کلستریدیوم پرفرِینجنس در باکتری e.coli بود. جهت مطالعه ژن کدکننده آلفاتوکسین، استخراجdna ژنومی با استفاده از کیت کیاژن صورت گرفت سپس با استفاده از آغازگرهای اختصاصی ژن با استفاده از تکنیک pcr تکثیر و در ناقل e.colipet28a کلون شد. با استفاده از هضم آنزیمی توسط آنزیم های hindiii و xhoi کلون مورد نظر تأیید شد. با توجه به موفقیت آمیز بودن کلونینگ ژن آلفا¬توکسین در باکتری های میزبان می توان گفت که اولأ پرایمرهای طراحی شده برای تکثیراین ژن اختصاصی اند، ثانیأ به عنوان یک مارکر جهت شناسایی و طبقه بندی این باکتری ها می توانند مورد استفاده واقع شوند. ثالثأ با ساخت واکسن های نوترکیب ژنتیکی مهندسی شده می توان راه کنترل و مقابله با پاتوژن های مهمی همچون باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس را امکان پذیر ساخت.
اساتید راهنما و مشاور
علی اسمعیلی زاده کشکوئیه، حسینعلی ساسان، مسعود اسدی فوزی، احمد آیت اللهی مهرجردی