بررسی ژن tpa انسانی در گیاهان ترانس پلاستومیکس نسل دوم (t1) توتون در سطوح مختلف (dna، rna و پروتئین)
چکیده
تولید پروتئین نوترکیب در گیاه به دلیل برخورداری از مزایای متعدد از قبیل هزینه تولید بسیار پایین و پتانسیل تولید پروتئین نوترکیب بالا از اهمیت بالایی برخوردار است. بیماری های قلبی و عروقی عامل مرگ و میر بسیاری در سطح جهان می باشند. پروتئین tpa یک پروتئین است که به صورت طبیعی در بدن تولید می شود و منجر به تجزیه لخته های خونی در بدن می شود؛ اما در بیماران قلبی و عروقی نیاز به سطح بالایی از پروتئین به منظور تجزیه لخته خونی که باعث انسداد عروق شده اند، می باشد تا لخته خونی در زمانی سریع قبل از آسیب جدی به بیمار تجزیه شود. بنابراین تولید این پروتئین به صورت نوترکیب از اهمیت بسزایی برخوردار است. در این تحقیق گیاهان ترانسپلاستومیکس حاوی ژن tpa نسل t1 مورد بررسی قرار گرفتند. بررسی در سطوح مختلف dna، rna و پروتئین با استفاده از روش های مختلف انجام گرفت تا پایداری ژن منتقل شده به کلروپلاست گیاهان در نسل t1 مورد ارزیابی قرار گیرد. بررسی در سطح dna وجود ژن مورد نظر در ژنوم کلروپلاست گیاهان را تایید نمود. همچنین بررسی در سطح rna بیان ژن مورد نظر را تایید نمود. در بررسی در سطح پروتئین از روش های مختلف استفاده شد. روش دات بلات و sds-page نتوانستند تولید پروتئین در گیاهان مورد بررسی را نشان دهند؛ اما بررسی توسط آزمون وسترن بلات تولید پروتئین با اندازه مورد نظر را در گیاهان نشان داد. در ادامه میزان تولید پروتئین با استفاده از آزمون الایزا مورد سنجش قرار گرفت که حداکثر میزان تولید پروتئین در پروتئین های محلول کل گیاه (tsp) %0/13 محاسبه شد.