انتقال ژن ال آسپارژیناز به ریشه مویین سیب زمینی به منظور تولید پروتئین نوترکیب
چکیده
امروزه استفاده از گیاهان تراریخت، به عنوان سیستم بیان پروتئین های نوترکیب دارویی، بسیار مورد توجه قرار گرفته است. یکی از روش های تولید پروتئین های نوترکیب، انتقال ژن های آن ها به سلول های گیاهی و ایجاد ریشه مویین از این سلول ها با استفاده از روش های انتقال ژن و کشت بافت گیاهی می باشد. آنزیم ها که کاربرد وسیعی در صنعت، پزشکی، داروسازی و درمان دارند، برای انتقال استفاده می شوند. آنزیم ال آسپارژیناز، یکی از آنزیم های دارویی مهم به شمار می رود که، در مراحل شیمی درمانی، جهت درمان سرطان، به ویژه در درمان لوسمی لنفوبلاستیک حاد (all) در کودکان مورد استفاده قرار می گیرد. در این تحقیق، ژن ال اسپاراژیناز2 (ansb) از باکتری e. coli yg001 (پروکاریوت) جداسازی شد و نهایتا چون باید به گیاه (یوکاریوت) منتقل و بیان می گردید، در نتیجه توالی آن بر اساس ترجیح کدونی سیب زمینی تغییر یافت. توالی مذکور به طور مصنوعی سنتز و در ناقل بیان pbi121 همسانه سازی گردید. ریشه های تراژن و شاهد در سطوح dna، rna و پروتئین مورد بررسی قرار گرفتند. وجود قطعه bp155حاصل از تکثیر ژن ansbتوسط آغازگرهای اختصاصی، در dna و cdna ریشه های مویین تراریخت و عدم وجود آن در ریشه های شاهد، حاکی از انتقال این ژن به ژنوم ریشه های تراریخت و نیز بیان این ژن در سطح rna بود. برای ارزیابی فعالیت پروتئین نوترکیب تولید شده نیز، عمل استخراج پروتئین از ریشه های تراژن انجام گرفت و آنالیز بدست آمده فعالیت بیشتری را نسبت به پروتئین شاهد نشان داد.