توسعه یک سازه ویروسی گیاهی مبتنی بر اجزاء ویروس گیاهی جهت ایجاد مقاومت به ویروس های گیاهی و تولید پروتئین های نوترکیب
چکیده
ویروس های نوترکیب گیاهی به دلیل اینکه آلودگی ایجاد شده توسط آن ها سریع و به صورت سیستمیک بوده است و همچنین باعث تولید مقادیر بالایی از پروتیین های نوترکیب در مدت زمان کمی پس از تلقیح می گردد، به عنوان ناقلین بیانی مورد استفاده قرار گرفته اند. خاموشی rna روند دفاعی قدرتمندی در گیاهان برای مقابله با ویروس های گیاهی است. این روند سبب تجزیه rna ویروس می شود و در نهایت، غلظت ویروس و ایجاد علائم در گیاه کاهش می یابد. اغلب ویروس های گیاهی پروتئین های سرکوب گر خاموشی rna viral suppressors of rna silencing(vsrs) را کد می کنند. این سرکوب گرها شامل تعدادی از پروتئین های ویروسی هستند که با اجزای مختلف مسیر خاموشی rna ، در مراحل مختلف برهم کنش دارند. هدف از این مطالعه بررسی امکان همسانه سازی ژن سرکوب گر خاموشیrna ویروس های گیاهی p19، در یک ناقل ویروسی گیاهی جهت طراحی یک سازه ویروسی گیاهی بود. این ژن از توالی ویروس گیاهی "بوته انبوهی گوجه فرنگی" tomato bushy stunt virus جداسازی شده است. در فرآیند طراحی یک سازه ویروسی از ناقل ویروسی ptrv2 استفاده شده است. ناقل ویروسی به باکتری escherishia coli سویه dh5? منتقل شده و جهت همسانه سازی ژن p19 در آن تخلیص گردید. آغازگرهای اختصاصی جهت تکثیر ژن p19 طراحی گردید سپس، ناقل ویروسیptrv2 و ژن p19 توسط آنزیم های برشی مشابه مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند. ژن p19 در ناقل ویروسی تحت کنترل پیشبرنده camv35s و خاتمه دهنده nos همسانه سازی شد. سازه بدست آمده p19- ptrv2 با روش شوک حرارتی به باکتری اشریشیاکلی سویهdh5? منتقل شده و باکتری های تراریخته به روی محیط کشت حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین50 میلی گرم در لیتر انتخاب شدند. با استفاده از تکنیک colony pcr، استخراج ناقل ویروسیp19- ptrv2 و واکنش تکثیر ژن p19 توالی یابی و هم ردیف سازی آن در بانک اطلاعاتی حضور ژن p19 در ناقل ویروسی گیاهی تأیید شد.