تغییرات الگوی متیلاسیون دو ژن nanog و rassf1 در سرم بیماران مبتلا به سرطان پستان
چکیده
سرطان پستان شایعترین سرطان دربین زنان جهان و ایران و دومین عامل مرگ ومیر زنان است. سالانه حدود 1.7 میلیون زن مبتلا به سرطان پستان در سراسر جهان شناسایی می شوند و هرسال بیش از پانصد هزار نفر براثر این بیماری جان خود را از دست میدهند. تشخیص زودهنگام میتواند مرگ ومیر این بیماران را کاهش دهد. اما روشهای کنونی تشخیص سرطان پستان از حساسیت پایینی برخوردارند. یکی از مکانیسم های مهم ایجاد سرطان، خاموش شدن ژن ازطریق متیله شدن پروموتر ژن هاست که میتواند برای تشخیص ودرمان سرطان استفاده شود. دراین مطالعه، ژن های nanog (مارکر سلولهای بنیادی) و rassf1a (سرکوبگر تومور) که تغییر الگوی متیلاسیون آنها درمراحل اولیه سرطان پستان نشان داده شده، بررسی شده اند. نمونه های بافتی وسرمی 24 بیمار ساکن مناطق شمالی ایران جمع آوری شد. dna بافت های سرطانی و سالم و سرم ها استخراج شدند. سپس تیمار بیسولفیت انجام شد. در هر مرحله کیفیت و کمیت dnas بررسی شدند. ابتدا دمای بهینه هر کدام از پرایمرهای طراحی شده با انجام واکنش gradient pcr به کمک dna کنترل بدست آمد و اختصاصیت آنها نیز سنجیده شد. سپس واکنش mspcr برای هرکدام از ژن ها توسط hotstartaq plus master mix kit انجام شد. داده ها با تست fisher آنالیز شدند. براساس نتایج بدست آمده متیلاسیون هیچ کدام از ژن های بررسی شده اختلاف معنی داری را بین بافت های تومور و سالم نشان نمی دهند. در این مطالعه، تکثیر همزمان dna متیله و غیرمتیله (m/u) با پرایمرهای اختصاصی در بافت های تومور و سالم مشاهد شد. این تکثیر غیراختصاصی شاید به چند دلیل باشد: 1) مخلوط بودن بافت های تومور و سالم. 2) هتروزیگوت بودن ژن های مورد مطالعه. متاسفانه ما به دلایل مشکلات تکنیکی، جداسازی و نگهداری غیراستاندارد سرم ها در محل نمونه گیری و متلاشی شدن سریع dna در سرم، توانستیم تنها از 2 نمونه سرم، dna برای انجام mspcr استخراج کنیم که از لحاظ آماری قابل آنالیز نیست.