طراحی و ساخت بیوسنسور ( dna elisa) جهت شناسایی باکتری e.coli atcc 25922 با استفاده مستقیم از dna ژنومی
چکیده
شناسایی باکتریهای پاتوژن کلید جلوگیری از بسیاری مشکلات مربوط به سلامتی است با توجه به زمانبر بودن روشهای مرسوم محققان به دنبال روشهای سریعتر با هزینه کمتر هستند. pcr ، کشت و شمارش کلنی و متدهای مبتنی بر ایمونولوژی رایجترین روشهای شناسایی باکتریها هستند. تاکنون باکتریهای بیماریزای مختلفی بر اساس روشهای نامبرده شناسایی شدند از میان آنها باکتری ایکلای شایعترین باکتری عفونت ادراری است و شناسایی آن اهمیت زیادی دارد. هدف از این پژوهش ساخت بیوسنسوری کم هزینه و در عین حال ساده به منظور شناسایی پاتوژنها با استفاده مستقیم از dna ژنومی بدون تکثیر با روش کالریمتری میباشد. در این آزمایش از دو پروب اختصاصی، به عنوان پروب نگهدارنده (نشاندار شده با بیوتین) و پروب شناساگر (نشاندار شده با dig )، مکمل ناحیه اختصاصی از ژن 16srrna و dna ژنومی باکتری ecoli atcc25922 استفاده شد. بعد از انجام فرایند هیبریداسیون و اضافه کردن آنزیم hrp متصل به آنتی دیگ و سپس سوبسترای مخصوص به آن (abts)، جذب نوری در 405 نانومتر خوانده شد. برای تعیین حساسیت تست از رقت های dna ژنومی باکتری استفاده شده و حداقل dnaی مورد نیاز برای تشخیص ارگانیسم 40هزار سلول تعیین گردید. همچنین آزمایشهای مشابه، به منظور مقایسه، با روش pcr-elisa نیز در ادامه پژوهش انجام شد و حساسیتی در حدود چهارصد سلول برای روش pcr- elisa بدست آمد. در نهایت مشخص گردید که اگرچه روشdna-elisa، در مقایسه با pcr-elisa از حساسیت کمتری برخوردار است اما، روش ارائه شده توانایی شناسایی باکتری بدون نیاز به تکثیر dna دارد و میتواند dna ژنومی را به طور مستقیم در مدت زمان کمتری در حدود 3 ساعت شناسایی کند. در حال حاضر تلاشهایی برای بهبود حساسیت تست در حال انجام است.