ساخت و ارزیابی ایمنی زایی پلاسمید نوترکیب واجد ژن گلیکوپروتئین e2 ویروس اسهال ویروسی گاو و بخش c3d کمپلمان گاو
چکیده
بیماری اسهال ویروسی گاو (bvd)، یکی از بیماری های مهم گاو است که با اسهال، سقط جنین، مردهزایی، بازگشت به فحلی و کاهش تولید شیر، خسارت های اقتصادی هنگفتی را سبب می شود. این بیماری توسط ویروس اسهال ویروسی گاو (bvdv) از خانواده فلاوی ویریده و جنس پستی ویروس ایجاد می شود. برنامه های مراقبتی مناسب مانند واکسیناسیون بر ضد ویروس bvd، اهمیت زیادی در پیشگیری و کنترل این بیماری دارند. پروتئین ساختمانی e2با وزن مولکولی kda 53، پروتئین ایمونوژن اصلی ویروس است و سبب القای آنتی بادی های محافظت کننده در حیوانات ایمن یا آلوده می گردد. به همین دلیل پروتئین e2 کاندید اصلی برای تولید واکسن های تحت واحد، واکسن dna و ویروس های نوترکیب می باشد. c3فراوانترین جزء کمپلمان پروتئینی کلیدی و فاکتور عمده ایمنی همورال در دفاع میزبان در سیستم کمپلمان می باشد. پژوهش های متعدد نشان داده اند که همراهی نسخه هایی از c3d ( آخرین جزء ناشی از شکست c3) در واکسن های dna به فعالیت پر توان ادجوانتی انجامیده است. هدف مطالعه حاضر ساخت و بررسی ایمنی زایی پلاسمید کد کننده e2 و جزء c3d کمپلمان گاو در موش بود. بدین منظور توالی کدکننده پروتئین e2 ویروس bvd سویه nadl با آزمایش rt-pcr تکثیر و درون وکتور بیانی یوکاریوتی pse-tag کلون شد. سپس سه نسخه از توالی ژن c3d به این پلاسمید افزوده گردید. 15 سر موش balb/c با سن 6-5 هفته به سه گروه 5 تایی تقسیم شده و به گروه اول [e2-(c3d)3]، µg 100پلاسمید حاوی ژن e2 به همراه سه نسخه از ژن c3d، گروه دوم (e2)،µg 100 پلاسمید حاوی ژن e2 به تنهایی و گروه سوم (شاهد)، پلاسمید بدون ژن های فوق تزریق شد. موش ها در مجموع 3 بار با فاصله دو هفته ایمن شده و در روزهای صفر ، 14، 28 و 42 از موش ها خونگیری به عمل آمد. عیار سرمی آنتی بادی ضد e2 در گروه های مختلف با استفاده از روش الیزا ارزیابی گردید. نتایج آزمون الایزا تفاوت معنی داری را میان موش های گروه های اول و دوم با گروه سوم نشان داد اما دو گروه اول تفاوت معنی داری نداشتند. با اینحال این یافته ها حاکی از آن بود که پلاسمید های حاوی ژن e2 تهیه شده در این مطالعه دارای پتانسیل ایمنی زایی بوده و می توانند به عنوان یک dna واکسن در مطالعات میدانی مورد ارزیابی دقیقتری قرارگیرند.