استاندارد سازی روش تشخیص مولکولی ent d استافیلوکوکوس آرئوس جدا شده از عفونت های انسانی و تعیین سکانس آن
چکیده
چکیده زمینه و هدف: انتروتوکسین d استافیلوکوکوس به عنوان یک سوپر آنتی ژن توسط نمونه های عفونی منابع انسانی و حیوانی تولید می گردد. هدف این تحقیق استاندارد سازی روش تشخیص استافیلوکوکوس تولید کننده ی انتروتوکسین d می باشد. روش بررسی: روش pcr جهت تشخیصent d در استافیلوکوکوس آرئوس های جدا شده از نمونه های انسانی (310 سویه جدا شده) set up گردید. محصول pcr خالص سازی و تعیین سکانس گردید. سکانس حاصل blast گردید. همچنین، توانایی تولید انتروتوکسین d تمام سویه های ناقل ent d نیز با کیت الیزا بررسی شدند. یافته ها: نتایج نشان داد، روش مولکولی pcr به خوبی set up شده است. زیرا، در یک مرحله پرایمرهای مورد استفاده دو باند تکثیر نمودند، یکی در محدوده ی bp 1400 و دیگری در محدود ه ی bp 700 بود. هر دو باند از روی ژل جدا و تعیین سکانس شدند. مقایسه ی سکانس حاصل از باند bp 700 با سکانس ژن استاندارد موجود در بانک ژن انطباق 99 درصد نشان داد. نتایج حاکی از آن بود که ent d در محصول bp 700 قرار دارد. چنان که multiple alignment سکانس حاصل با سکانس ژن استاندارد مقایسه و تأیید گردید. توکسین زایی سویه های ناقل ent d با آزمون الیزا تأیید گردید. نتیجه گیری: بر اساس اطلاعات موجود، در حال حاضر سویه های استافیلوکوکوس آرئوس کواگولاز مثبت در نمونه های بالینی مورد توجه قرار می گیرند. اما روشی جهت نشان دادن توانایی تولید انتروتوکسین ها از جمله انتروتوکسین d وجود ندارد. تحقیق حاضر روشی ساده و سریع جهت تأیید توانایی توکسین زایی باکتری را ارایه و تشخیص سویه های تولید کننده ی انتروتوکسین d را استاندارد سازی نموده است.