مقاله

کلون سازی و بیان ژن میدکاین نوترکیب انسانی در اشریشیاکولای سویه ی اوریگامی

سعادت الله غفاری، دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران علی اصغر دلدار، گروه ژنتیک و بیوشیمی دانشگاه صنعتی مالک اشتر تهران علی بهرامی، گروه ژنتیک و بیوشیمی دانشگاه صنعتی مالک اشتر تهران عمران اسماعیل زاده، گروه ژنتیک مولکولی، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری تهران بهارک مهیاد، گروه ژنتیک و بیوشیمی دانشگاه صنعتی مالک اشتر تهران فاطمه روح الله، دانشگاه آزاد اسلامی واحد پزشکی تهران

دانلود متن کاملرایگان، با حساب کاربری؛ ثبت نام با گوگل چند ثانیه است

چکیده

هدف: هدف این پژوهش کلون سازی و بیان ژن کد کننده‏ی میدکاین انسانی در اشریشیاکولای بوده که پس از انجام مراحل لازم در مقیاس آزمایشگاهی محقق گردید. مواد و روش‏ها: روش ها شامل کشت سلول، استخراج rna، ساخت cdna، تکنیک های کلون سازی، القای بیان با iptg (ایزوپروپیل تیوگالاکتوزیداز)، ارزیابی بیان به‏وسیله ی ژل پلی اکریل آمید و تایید توسط وسترن بلات بود. نتایج: ژن میدکاین در pet-21a(+) کلون و سپس به اوریگامی منتقل شد. این فاکتور رشد در کلونی حاوی pet-21a(+) نوترکیب پس از 16 ساعت انکوباسیون در دمای 18 درجه سانتی‏گراد با هم زدن در 250 دور در دقیقه، در سطح سیتوپلاسمی بیان گردید. بیان پروتئین 13 کیلودالتونی دارای دم هیستیدینی از طریق وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت. نتیجه گیری: با توجه به اینکه سویه اوریگامی در ژن های trxb و gor جهش یافته است، سینوپلاسم محیطی اکسید کننده می باشد، به‏همین سبب باعث افزایش تشکیل باندهای دی سولفید می‏شود. بنابراین به‏نظر می‏رسد که پس از بیان میدکاین، باقی مانده‏های سیتوزین به‏صورت محلول باقی می‏مانند. این شرایط باعث به‏وجود آمدن محیط مناسبی برای فولدینگ صحیح پروتئین و حل شدن آن می‏شود.

اسناد مشابه

  • بررسی کلون و بیان هورمون نوترکیب انسانی پاراتیروئید در مقیاس آزمایشگاهی

    مقاله۲۰۲۰شیمی و مهندسی شیمی ایرانصادق مجدی، حسین امانی، قاسم نجف پور، مجید شهبازی

    حفظ سطح غلظت کلسیم خون یک فرایند پویا است که با بر هم کنش چند عضو مانند روده، کلیه و غده های پاراتیروئید صورت می گیرد. هورمون انسانی پاراتیروئید (hPTH)با افزایش جذب روده ای کلسیم و کاهش دفع کلیوی موجب افزایش سطح کلسیم خون می شود. از آنجایی که در صورت ناکافی بودن مقدار کلسیم در خو

  • کلون سازی و بیان ژن میدکاین نوترکیب انسانی در اشریشیاکولای سویه‌ی اوریگامی

    مقاله۲۰۱۵سلول و بافتسعادت الله غفاری، علی اصغر دلدار، علی بهرامی، عمران اسماعیل زاده

    هدف: هدف این پژوهش کلون سازی و بیان ژن کد کنندهی میدکاین انسانی در اشریشیاکولای بوده که پس از انجام مراحل لازم در مقیاس آزمایشگاهی محقق گردید.مواد و روشها: روش‌ها شامل کشت سلول، استخراج RNA، ساخت cDNA، تکنیک‌های کلون‌سازی، القای بیان با IPTG (ایزوپروپیل‌تیوگالاکتوزیداز)، ارزیابی

  • تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب در سویه اوریگامی اشریشیاکلی و مقایسه میزان استخراج آن با دو روش اولتراسونیک و انجماد و ذوب

    مقالهزیست شناسی میکروارگانیسم هامرضیه سواری، کارشناسی ارشد میکروبیولوژی، ‏‏‏دانشگاه اصفهان، ‏‏‏ایران سیدحمید زرکش اصفهانی، هیات علمی

    مقدمه: هورمون رشد انسانی یک پروتئین تک‏رشته است که دارای 191 اسید‏آمینه و وزن مولکولی حدود 22 کیلودالتون است. به علت فعالیت‏های زیستی مهم و متنوع هورمون رشد، این هورمون دارای کاربردهای گسترده‏ایی در پزشکی و بیوتکنولوژیست. از اواخر سال 1970 استفاده از بیان ژن برای تولید پروتئین‏ها

  • تولید هورمون رشد انسانی نوترکیب در سویه اوریگامی اشریشیاکلی و مقایسه میزان استخراج آن با دو روش اولتراسونیک و انجماد و ذوب

    مقاله۲۰۱۵زیست شناسی میکروارگانیسم هامرضیه سواری، سیدحمید زرکش اصفهانی

    مقدمه: هورمون رشد انسانی یک پروتئین تکرشته است که دارای 191 اسیدآمینه و وزن مولکولی حدود 22 کیلودالتون است. به علت فعالیتهای زیستی مهم و متنوع هورمون رشد، این هورمون دارای کاربردهای گستردهایی در پزشکی و بیوتکنولوژیست. از اواخر سال 1970 استفاده از بیان ژن برای تولید پروتئینهای نوت

  • استرپتوکیناز: استخراج،کلون سازی و بیان بالای پروتئین نوترکیب فعال

    مقالهپژوهش در پزشکیمحمدرضا نژاد مقدم، mr1 nejad moghaddam research center for biologic nanotechnology, avesina research institute for modern medical science, tehran* مرکز تحقیقات نانوتکنولوژی زیستی، پژوهشکده فن آوری های نوین علوم پزشکی جهاد دانشگاهی ابن سینا، تهران سیدمحمدحسین مدرسی، mh2 modarresi 2research center for reproductive biotechnology, avesina research institute for modern medical science, tehran** مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی تولیدمثل، پژوهشکده فن آوری های نوین علوم پزشکی جهاد دانشگاهی ابن سینا، تهران محمد باباشمسی، m3 babashamsi 3research center for monoclonal antibody, avesina research institute for modern medical science, tehranمرکز تحقیقات آنتی بادی منوکلونال، پژوهشکده فن آوری های نوین علوم پزشکی جهاد دانشگاهی ابن سینا، تهران محمود چمن خواه

    چکیده سابقه و هدف: استرپتوکیناز به عنوان شناخته شده ترین داروی فیبرینولیتیک، مدت مدیدی است در درمان سکته قلبی استفاده می شود. ویژگیهای ساختاری ساده این پروتئین زمینه لازم برای دستیابی به انواع نوترکیب آن را فراهم ساخته است. هدف از این تحقیق تهیه سوش استرپتوکوک equisimilis h46a (پ

  • ارزیابی بیان فاکتور محرک کلنی گرانولوسیت نوترکیب انسانی با کدون بهینه شده در دو سویه بیانی اشریشیا کلی origami وbl۲۱

    مقالهمجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولیسید حمید رضا خاتمی، hamid reza khatami department of bioscience and biotechnology, malek ashtar university, tehran, iran.ژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران رامین فلاح زاده، ramin fallah zadeh department of bioscience and biotechnology, malek ashtar university, tehran, iran.ژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران جلیل فلاح مهرآبادی، jalil fallah mehrabadi department of bioscience and biotechnology, malek ashtar university, tehran, iran.ژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران محمد داود غفاری

    سابقه و هدف: فاکتور محرک کلنی گرانولوسیت (g-csf) به عنوان فاکتور رشد هماتوپوئیتیک می تواند سلول های بالغ خونی را تحریک نمایند و امروزه نوع نوترکیب آن در درمان نوتروپنی ناشی از شیمی درمانی سرطان های سرکوبگر میلوئید، پیوند مغز استخوان، شیمی درمانی در لوسمی میلوئید حاد و نوتروپنی مز