همسانه سازی ژن virg و ساخت سازه جهش یافته pgem∆virg به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا دیسانتری بومی

حورا احمدی دانش، hora ahmadi danesh msc student of cellular and molecular biology, department of cell biology, faculty of science, imam hossein university, tehran, iranدانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی، گروه زیست شناسی سلولی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه جامع امام حسین (ع) مجتبی سعادتی، mojtaba saadati phd of bacteriology, department of cell biology, faculty of science, imam hossein university, tehran, iranدکترای باکتری شناسی، گروه زیست شناسی سلولی، دانشکده علوم، دانشگاه امام حسین (ع) محمد درودیان، mohammad doroudian msc student of cellular and molecular biology, islamic azad university, central tehran branch, young reserchers club, tehran, iranدانشجوی کارشناسی ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد تهران مرکز، باشگاه پژوهشگران جوان باقر یخچالی، bagher yakhchali phd of microbiology, department of industrial and environmental biotechnology, national institute of genetics and biotechnology, tehran, iranدکترای میکروبیولوژی، گروه صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری علی اصغر کارخانه، ali asghar karkhaneh phd of molecular genetics, department of industrial and environmental biotechnology, national institute of genetics and biotechnology, tehran, iranدکترای ژنتیک مولکولی، گروه صنعت و محیط زیست، پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری سیدمصطفی حسینی، sayed mostafa hosseini young researchers club, islamic azad university, science and research campus, tehran, iranباشگاه پژوهشگران جوان، دانشگاه آزاد اسلامی، ، واحد علوم تحقیقات مختار زارع

چکیده

سابقه و هدف: بیماری شیگلوز از علل عمده ابتلا کودکان به اسهال در ایران است و ژن virg نقش کلیدی را در بیماری زایی و قدرت تهاجم باکتری شیگلا بازی می کند. هدف از این مطالعه، همسانه سازی، توالی یابی ژن virg و ساخت سازه جهش یافته pgem∆virg به منظور القای نوترکیبی در سویه شیگلا بومی با هدف ساخت سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته است. روش بررسی: با استفاده از آزمون های بیوشیمیایی، سویه شیگلای بومی بررسی و ژن virg در حامل pgem-7zf همسانه سازی و سپس توالی نوکلئوتیدی آن تعیین گردید. بر اساس اطلاعات حاصل از توالی یابی، نقشه برش آنزیمی حامل نوترکیب pgemvirg استخراج و نسبت به حذف نواحی از ژن virg با استفاده از واکنش هضم آنزیمی اقدام شد. در نهایت، سازه pgem∆virg با به کار گیری روش شیمیایی به باکتری اشرشیاکلی تراریخت سازی گردید. یافته ها: سویه شیگلای بومی تایید گردید. توالی یابی ژن virg در پایگاه داده های ژنومیncbi) ) ثبت گردید. سازه pgem∆virg یک ساختار جهش یافته از ژن virg در باکتری اشریشیاکلی را شامل می شود که 1751 جفت باز از آن، از طریق واکنش هضم آنزیمی حذف شده است. نتیجه گیری: استفاده از تکنیک تبادل آللی بر پایه بهره گیری از رخداد نوترکیبی در باکتری ها یکی از موثرترین روش های ایجاد گسستگی در ژن های هدف می باشد. این ساختار جهش یافته می تواند به منظور ایجاد سویه کاندید واکسنی زنده تقلیل حدت یافته شیگلا دیسانتری مورد استفاده قرار گیرد.