مقاله

رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین hiv-۱ nef در سیستم بیان پروکاریوتی

بهنازسادات جعفرزاده، behnaz sadat jafarzade سید مهدی سادات، seyyed mehdi sadat رامین یعقوبی، ramin yaghobi اعظم بوالحسنی، azam bolhassani

چکیده

سابقه و هدف: پروتئین nef، یکی از پروتئین­های تنظیمی ویروس hiv، دارای اپی­توپ­ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ­ های ایمنی قدرتمندی علیه آنها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می­ باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتئین nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگ­آمیزی معکوس می­ باشد. مواد و روش­ ها: توالی کدکننده پروتئین nef از وکتور puc19 توسط pcr تکثیر شد و الحاق آن به داخل وکتور بیانی pgex6p2 انجام شد. این سازه طی فرایند ترانسفورماسیون به سویه باکتری e.coli bl21 منتقل شده و القای بیان پروتئین با استفاده از آنتی­رپرسور iptg صورت گرفت. تأیید بیان پروتئین با استفاده از آنالیز sds-page و وسترن بلات توسط آنتی­ بادی ضد nef بررسی گردید. تخلیص پروتئین با استفاده از تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد. نتایج: نتایج آنالیز pcr و هضم آنزیمی وجود باند واضح حدود 648 جفت باز را روی ژل آگاروز تأیید کرد که نشان­گر کلونینگ صحیح ژن nef در وکتور بیان پروکاریوتی pgex6p2 می­ باشد. هم­ چنین، وجود باند حدود 50 کیلودالتون نشان­گر بیان پروتئین nef توسط آنتی­بادی منوکلونال ضد nef در آنالیز وسترن بلات تأیید شد. در نهایت، باند خالص شده پروتئین توسط تکنیک رنگ­آمیزی معکوس به ­دست آورده شد. نتیجه­ گیری: پروتئین نوترکیب nef بیان شده در میزبان e. coli با بازده مناسب توسط روش رنگ­ آمیزی معکوس تخلیص شد. پروتئین nef در آینده به­ عنوان یک آنتی­ژن برای طراحی واکسن پروتئینی در مقابل عفونت ویروس hiv استفاده خواهد شد.

اسناد مشابه

  • رنگ آمیزی معکوس: روشی مؤثر برای تخلیص پروتئین HIV-1 Nef در سیستم بیان پروکاریوتی

    مقاله۲۰۱۶فیضبهنازسادات جعفرزاده، سید مهدی سادات، رامین یعقوبی، اعظم بوالحسنی

    سابقه و هدف: پروتئین Nef، یکی از پروتئین­ های تنظیمی ویروس HIV، دارای اپی­توپ­ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ­ های ایمنی قدرتمندی علیه آن ها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین Nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می­ باشد. هدف این پژوهش ک

  • همسانه سازی، بهینه سازی شرایط بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب Nef-MPER-V3 ویروس HIV-1 در سیستم بیانی پروکاریوتی

    مقاله۲۰۲۲مجله علوم پزشکی پارساحمد فقیه، سید مهدی سادات، اعظم بوالحسنی، شیوا ایرانی

    مقدمه: پروتئین تنظیمی Nef و همچنین پروتئین های ساختاری MPER و V3 ویروس HIV-1 از اهداف مهم در مطالعات واکسن به شمار می روند. از این رو در مطالعه حاضر، پروتئین فیوژن Nef-MPER-V3 در سیستم بیانی پروکاریوتی کلون و بیان شد تا به عنوان کاندید مناسب در مطالعات آتی واکسن مورد ارزیابی قرار

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی اراکسمیه کدخدایان، somayeh kadkhodayan department of biology, sciences and research branch, islamic azad university, tehran, iran.گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران. شیوا ایرانی، shiva irani department of biology, science and research branch, islamic azad university, tehran, iranگروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) سید مهدی سادات، seyed mehdi sadat department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran, iran.بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) فاطمه فتوحی

    زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv