طراحی، ترانسفورماسیون و تکثیر ایزوفرم نوترکیبvegf۱۱۱b در e. coli top۱۰ برای تولید داروی نوترکیب

مرتضی صادقی، morteza sadegi genetic research center, baqiyatallah university of medical sciences, tehran, i. r. iran.تهران، میدان ونک، خیابان ملاصدرا، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله، بخش ژنتیک زهره حجتی، zohreh hojjati

چکیده

سابقه و هدف: سنتز پروتئین­های نوترکیب با خاصیت مهار گیرنده­ های رشد در تومورهای سرطانی یکی از راه­ های جدید درمان سرطان است. هدف مطالعه حاضر طراحی و کلون ایزوفرم نوترکیبvegf111b در وکتور pbudce4.1 و بررسی سازگاری این سازه با باکتری e. coli top10 جهت تولید داروی نوترکیب است. مواد و روش ­ها: ایزوفرم جدید vegf111b با استفاده از توالی­های موجود در بانک­های ژنی و نرم­افزار 7 oligoطراحی شده و توسط آنزیم­های bglii و kpni بریده شده و در پایین دست پروموتور ef-1 در وکتور pbudce4.1 کلون شد. وکتور نوترکیب pbud.vegf111b توسط روش کلرید کلسیم در باکتری e. coli top10 ترانسفورم شد. جداسازی باکتری­ های نوترکیب در محیط lba حاوی غلظت 3/0 و 5/0 درصد آنتی­بیوتیک زئوسین انجام شد. در مرحله آخر وکتور نوترکیب با استفاده از کیت استخراج dna از ژل (thermo k0513) استخراج شده و وجود قطعه نوترکیب vegf111b توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی تائید شد. نتایج: الحاق قطعه 111b در جایگاه مورد نظر تائید شد. تمامی کلونی­های e. coli top10 مشاهده شده در محیط حاوی غلظت 0/5 درصد زئوسین حاوی قطعه نوترکیب vegf111b بودند و در غلظت 0/3 درصد زئوسین، 61/9 درصد کلونی نوترکیب مشاهده شد. وجود توالیvegf111b در باکتری ­های نوترکیب توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی تائید شد. نتیجه گیری: مطالعه حاضر گامی مهم در جهت تولید داروی نوترکیبvegf111b و بررسی عملکرد ضد سرطانی این پروتئین است. وکتورpbudce4.1 با دارا بودن 2 جایگاه کلونینگ و 8 جایگاه برش آنزیمی کاندید مناسبی برای کلونینگ و بیان پروتئین­ های نوترکیب در e. coli top10 است.