کلونینگ و بررسی بیان ژن کد کننده bmp-۲ انسانی در باکتری e. coli به منظور تولید یک داروی نوترکیب
چکیده
مقدمه و هدف: پروتئین های مورفوژنتیک استخوانی، گروهی از سایتوکاین های متعلق به ابرخانواده tgfβ می باشند. این پروتئین ها در تکامل بسیاری از ارگان ها و بافت ها، طی دوران جنینی و پس از آن در ترمیم و بازسازی بافت های استخوان و غضروف، نقش دارند. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بررسی بیان این پروتئین در باکتری e.coli می باشد. روش کار: در این مطالعه تجربی توالی cdna مربوط به پپتید بالغ پروتئین مورفوژنتیک انسانی2 (bmp-2) در باکتری e.coli کلون شد. پلاسمید نوترکیب pet28a/bmp-2 پس از توالی یابی به باکتری بیانی (e.coli bl21(de3 ترانسفرم گردید. باکتری نوترکیب در محیط lb مایع حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین در دمای c°37 کشت داده شد. القا با iptg صورت گرفت. بررسی بیان به کمک rt-pcr و sds-page و تأیید بیان با وسترن بلاتینگ انجام شد. نتایج: توالی ژنی به کمک pcr تکثیر یافت. بعد از آماده سازی ژن و پلاسمید، واکنش اتصال صورت گرفت. توالی یابی، صحت کلونینگ را نشان داد. بررسی بیان با rt-pcr و sds-page نشان دهنده بیان پروتئین بود. وسترن بلاتینگ نتایج را تأیید کرد. نتیجه نهایی: بیان بالای پروتئین نوترکیب در سیستم پروکاریوتی حاصل شد. استفاده از غلظت های متفاوت القا کننده در ساعت های مختلف نشان داد که 4 ساعت بعد از القا با غلظت 1mm از iptg ، بیشترین بیان را داریم.