کلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pbad
علیرضا مردادی، alireza mordadi msc student in medical microbiology, department of microbiology, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranدانشجوی کارشناسی ارشد میکوب شناسی، گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران فهیمه حاجی احمدی، fahimeh haji ahmadi phd student in medical bacteriology, department of microbiology, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranدانشجوی دکتری تخصصی باکتری شناسی، گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران سارا سلیمانی اصل، sara soleimani asl assistant professor, department of anatomy, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranاستادیار، گروه آناتومی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران محمدرضا عربستانی، mohammd reza arabestani assistant professor, department of microbiology, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranهمدان: دانشگاه علوم پزشکی همدان، دانشکده پزشکی، گروه میکروبشناسی پیوتر ژودا، piotr szweda assistant professor, brucellosis research centre, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iran. استادیار، مرکز تحقیقات بروسلوز، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران
چکیده
سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس یک پاتوژن مهم بیمارستانی بوده و باعث ایجاد بیماری هایی همچون اندوکاردیت، استئومیلیت، پنومونی، سندرم شوک سمّی و مسمومیت غذایی می گردد. امروزه استفاده بیش از حد و نامناسب از آنتی بیوتیک ها در درمان این بیماری ها باعث مقاومت این ارگانیسم به بسیاری از آنتی بیوتیک ها شده است. لیزواستافین به عنوان یک عامل موثر و اختصاصی در درمان عفونت های استافیلوکوکی محسوب می شود. هدف از این مطالعه تولید لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pbad می باشد. مواد و روش ها: در مرحله اوّل، ساخت پلاسمید نوترکیب pbad با استفاده از سیستم pbad/thio-topo تحت عنوان pbadlys انجام گرفت. سپس به منظور بیان ژن لیزواستافین از آزمون reverse transcriptase pcr استفاده گردید. در مرحله بعد، بیان لیزواستافین نوترکیب در سیستم pbad انجام شد که بیان پروتئین با ال-آرابینوز در غلظت نهایی 2/0 درصد القاﺀ گردید. سپس خالص سازی آنزیم با استفاده از ستون ni-nta agarose (qiagene, hilden, germany) انجام گرفت و در نهایت بررسی فعالیت آنزیمی با استفاده از محیط مولر هینتون آگار و ایجاد هاله عدم رشد مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: با توجه به نتایج حاصل شده از pcr و تعیین توالی، پلاسمید نوترکیبpbad با موفقیت ساخته شد. بیان پروتئین با استفاده از ال-آرابینوز در غلظت نهایی 2/0 درصد به خوبی القاﺀ و غلظت بسیار بالایی از آنزیم نوترکیب با استفاده از سیستم کروماتوگرافی ستونی نیکل حاصل گردید. لیزواستافین نوترکیب دارای فعالیت بسیار اختصاصی بر علیه استافیلوکوکوس اورئوس می باشد. استنتاج: آنزیم لیزواستافین نوترکیب حاصل شده با استفاده از سیستم بیانی pbad با توجه به میزان حاصل شده بسیار مقرون به صرفه از نظر هزینه می باشد و همچنین با عملکرد اختصاصی بر روی استافیلوکوکوس اورئوس بسیار موثر است.
سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس یک پاتوژن مهم بیمارستانی بوده و باعث ایجاد بیماری‌هایی همچون اندوکاردیت، استئومیلیت، پنومونی، سندرم شوک سمّی و مسمومیت غذایی می‌گردد. امروزه استفاده بیش از حد و نامناسب از آنتی‌بیوتیک‌ها در درمان این بیماری‌ها باعث مقاومت این ارگانیسم به بسیاری از
مقالهپژوهش های آسیب شناسی زیستیelahe mahmoudi، ph.d. student, department of medical mycology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran hamid reza kalhor، assistant professor, department of biochemistry, faculty of biolocical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran mohammad hossein yadegari، assistant professor, department of medical mycology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran majid sadeghizadeh
هدف: آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی (sap2) کاندیدا آلبیکنس نقش محوری در اتصال، تهاجم و بیماریزایی این مخمر فرصتطلب دارد. هدف از این مطالعه کلون نمودن، بیان و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم sap2 است. همچنین در این تحقیق برای اولین بار، از سیستم یوکاریوتی پیکیا پاستوریس برای بیان
لیپازها یکی از پرکاربردترین آنزیم‌ها در صنایع بیوتکنولوژی و شیمی آلی هستند به طوری که به عنوان سومین آنزیم صنعتی اهمیت فراوانی داشته و مطالعات بسیاری بر روی آنها در حال انجام می‌باشد. لیپازهای باکتریایی از خانواده β/α هیدرولازها بوده که تری‌گلیسریدها را در حدفاصل آب و
مقالهمجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولیسمیه احتشام، somayeh ehtesham ehtesham department of biology, faculty of sciences, islamic azad university, parand branch,tehran-iranگروه زیست شناسی ، دانشکده علوم زیستی ، دانشگاه آزاد اسلامی واحدپرند، تهران،ایران سید محسن اصغری، s. mohsen asghari department of biology, faculty of science, university of guilan, guilan -iranگروه زیست شناسی ، دانشکده علوم پایه ، دانشگاه گیلان، گیلان، ایران افسانه صدر ممتاز، afsaneh sadre momtaz department of biology, faculty of science, university of guilan, guilan -iranگروه زیست شناسی ، دانشکده علوم پایه ، دانشگاه گیلان، گیلان، ایران
سابقه و هدف: الاستاز حاصل از سودوموناس آئروجینوزا یک آنزیم مهم در زمینه مطالعات بنیادی بر روی zn-متالوپروتئازها و نیز بعنوان فاکتور ویرولانس این باکتری مطرح است. در این مطالعه ژن مربوط به آنزیم الاستاز از سودوموناس آئروجینوزا (pae) استخراج و کلون شده و پس از بیان و تخلیص، خصوصیات
سابقه و هدف: الاستاز حاصل از سودوموناس آئروجینوزا یک آنزیم مهم در زمینه مطالعات بنیادی بر روی Zn-متالوپروتئازها و نیز بعنوان فاکتور ویرولانس این باکتری مطرح است. در این مطالعه ژن مربوط به آنزیم الاستاز از سودوموناس آئروجینوزا (PAE) استخراج و کلون شده و پس از بیان و تخلیص، خصوصیات
سابقه و هدف: آنزیم‌های تجزیه کننده پروتئین یا پروتئولایتیک با انجام هیدرولیز برگشتناپذیر پیوند پپتیدی برای ادامه بقای موجودات زنده ضروری هستند. کربوکسی‌پپتیدازها از جمله آنزیم‌های پروتئولایتیکی هستند که در موجودات بسیاری یافت می‌شوند و از این آنزیم‌ها در صنایع مختلف - مثل صنایع غ