بیان، خالصسازی و بررسی فعالیت آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی sap۲ کاندیدا آلبیکنس در سیستم مخمری پیکیا پاستوریس
elahe mahmoudi، ph.d. student, department of medical mycology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran hamid reza kalhor، assistant professor, department of biochemistry, faculty of biolocical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran mohammad hossein yadegari، assistant professor, department of medical mycology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran majid sadeghizadeh، professor, department of genetics, faculty of biolocical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran zohair mohammad hassan، professor, department of medical immunology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran
چکیده
هدف: آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی (sap2) کاندیدا آلبیکنس نقش محوری در اتصال، تهاجم و بیماریزایی این مخمر فرصتطلب دارد. هدف از این مطالعه کلون نمودن، بیان و بررسی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم sap2 است. همچنین در این تحقیق برای اولین بار، از سیستم یوکاریوتی پیکیا پاستوریس برای بیان پروتئین نوترکیب sap2 استفاده شد. مواد و روشها: ژن sap2 کاندیدا آلبیکنس با انتهاهای چسبان ecor1 و sacii توسط pcr تکثیر و درون ناقل t/a سابکلون شد. با استفاده از آغازگرهای عمومی توالی این ژن تعیین شد و سپس درون ناقل بیانی pgapzαa قرار گرفت. سازه نوترکیب به درون مخمر پیکیا پاستوریس انتقال داده شد. ژن sap2 طی پدیده نوترکیبی همولوگ درون ژنوم مخمری پیکیا پاستوریس داخل شد. پروتئین بیان شده به کمک روش وسترن بلاتینگ و با استفاده از آنتیبادی مونوکلونال بر علیه پروتئین sap2 تأیید شد. در نهایت پروتئین بهدست آمده با کمک ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی ni-nta تخلیص و فعال بودن آنزیم تأیید شد. نتایج: در این تحقیق تکثیر ژن sap2 کاندیدا آلبیکنس و وارد نمودن آن درون ژنوم مخمر بیانی پیکیا پاستوریس با روش نوترکیبی همولوگ انجام شد. علاوه بر این، کلونی از مخمر را بهدست آمد که پروتئین نوترکیب sap2 را به محیط ترشح میکرد. بالاترین بیان پس از طی زمان 96 ساعت در دمای 30 درجه سانتیگراد بهدست آمد. نتیجهگیری: القای ژن sap2 در مخمر پیکیا پاستوریس منجر به افزایش قدرت بیان انبوه این ژن نسبت به سیستم بیانی باکتریایی میشود. همچنین نیاز به تغییرات بعد از ترجمه و فعال نمودن آنزیم، به علت استفاده از سیستم بیانی یوکاریوتی، از بین میرود. برطبق یافتههای تحقیق حاضر، آسپارتیل اسید پروتئیناز تخلیص شده در این تحقیق خود فعال بوده و قادر به تجزیه bsa بهعنوان یک سوبسترا است. این پروتئین نوترکیب در ph اسیدی بیشترین فعالیت را دارد.
مقدمه: چویل گیاهی دارویی از خانواده چتریان است و از زمانهای قدیم در پزشکی کاربرد وسیعی داشته است. مطالعه حاضر به منظور ارزیابی تأثیر مهاری عصارههای آبی و اتانولی برگ و ساقه گیاه چویل بر آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحی کاندیدا آلبیکانس انجام شد. روش کار: در این مطالعه مقطعی، 19 جدا
پایان‌نامه۲۰۰۹وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه تربیت مدرسالهه محمودی
آنزیم آسپارتیل پروتئیناز ترشحیsap2 کاندیدا آلبیکنس نقش محوری در اتصال، تهاجم و سیستمیک شدن این مخمر فرصت طلب دارد. هدف از این مطالعه کلونینگ، بیان و خالص سازی آنزیم sap2 کاندیدا آلبیکنس در مخمر متیلوتروفیک پیکیا پاستوریس بود. پس از آن اثر آنزیم فعال نوترکیب بر فعالیت ماکروفاژهای
مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی مازندرانعلیرضا مردادی، alireza mordadi msc student in medical microbiology, department of microbiology, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranدانشجوی کارشناسی ارشد میکوب شناسی، گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران فهیمه حاجی احمدی، fahimeh haji ahmadi phd student in medical bacteriology, department of microbiology, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranدانشجوی دکتری تخصصی باکتری شناسی، گروه میکروب شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران سارا سلیمانی اصل، sara soleimani asl assistant professor, department of anatomy, faculty of medicine, hamedan university of medical sciences, hamedan, iranاستادیار، گروه آناتومی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی همدان، همدان، ایران محمدرضا عربستانی
سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس یک پاتوژن مهم بیمارستانی بوده و باعث ایجاد بیماری هایی همچون اندوکاردیت، استئومیلیت، پنومونی، سندرم شوک سمّی و مسمومیت غذایی می گردد. امروزه استفاده بیش از حد و نامناسب از آنتی بیوتیک ها در درمان این بیماری ها باعث مقاومت این ارگانیسم به بسیاری از
سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس یک پاتوژن مهم بیمارستانی بوده و باعث ایجاد بیماری‌هایی همچون اندوکاردیت، استئومیلیت، پنومونی، سندرم شوک سمّی و مسمومیت غذایی می‌گردد. امروزه استفاده بیش از حد و نامناسب از آنتی‌بیوتیک‌ها در درمان این بیماری‌ها باعث مقاومت این ارگانیسم به بسیاری از
تغییرات پاتوفیزیولوژیک در دهان بیماران مبتلا به دیابت ملیتوس زمینه را برای رشد بیش از حد کاندیدا آلبیکنس فراهم می‌نماید. فاکتورهای ویرولانس مختلفی مانند تولید آنزیم پروتئیناز و فسفولیپاز در فرایند تخریب غشای سلولی میزبان دخیل هستند. این آنزیم‌ها در اتصال گونه‌های کاندیدا به‌ویژه
سابقه و هدف: آنزیم‌های تجزیه کننده پروتئین یا پروتئولایتیک با انجام هیدرولیز برگشتناپذیر پیوند پپتیدی برای ادامه بقای موجودات زنده ضروری هستند. کربوکسی‌پپتیدازها از جمله آنزیم‌های پروتئولایتیکی هستند که در موجودات بسیاری یافت می‌شوند و از این آنزیم‌ها در صنایع مختلف - مثل صنایع غ