تولید آزمایشگاهی فاکتور رشد اپیدرم انسانی نوترکیب و ارزیابی عملکرد آن در بقای سلولی

سارا پورانوری، sara pouranvari ph.d in molecular genetics, department of biology, islamic azad university, science and research branch, tehran, iranphd رشته ژنتیک مولکولی، گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات، تهران، ایران فیروز ابراهیمی، firouz ebrahimi assistant professor, faculty of basic sciences, biology research center, imam hussein university, tehran, iranتهران: اتوبان شهید بابایی، دانشگاه امام حسین (ع)، گروه و مرکز تحقیقات زیست شناسی تهران: اتوبان شهید بابایی، دانشگاه امام حسین (ع)، گروه و مرکز تحقیقات زیست شناسی غلامرضا جوادی، gholamreza javadi associate professor, department of biology, islamic azad university, science and research branch, tehran, iranدانشیار، گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی، واحد علوم و تحقیقات، تهران، ایران بزرگمهر مداح، bozorgmehr maddah associate professor, department of chemistry, faculty of basic sciences, imam hussein university, tehran, iran. دانشیار، گروه شیمی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه امام حسین (ع)، تهران، ایران

چکیده

سابقه و هدف: فاکتور رشد اپیدرم انسانی (hegf)، پلی پپتیدی دارای 53 اسید آمینه است که کاربردهای وسیعی در پزشکی و به ویژه ترمیم زخم دارد. هدف از این پژوهش، همسانه سازی، بیان و تخلیص hegf نوترکیب و بررسی اثر میتوژنیک آن بر دودمان سلولی nih3t3 بود. مواد و روش ها: زیرهمسانه سازی ژن hegf، درون وکتور pet24a صورت گرفت. بیان پروتئین تحت شرایط استاندارد صورت گرفت. از آن جایی که بیان پروتئین به صورت کنجاله های نامحلول بود، محلول سازی ملایم با استفاده از بافری با ph قلیایی صورت گرفت. در نهایت و پس از ایجاد تاخوردگی مجدد، اثر میتوژنیک این پروتئین در غلظت های مختلف بر دودمان سلول nih3t3مورد بررسی قرار گرفت. یافته ها: محلول سازی ملایم کنجاله های نامحلول با بافر قلیایی و پس از آن انجام تاخوردگی مجدد دارای بازده بسیار بالایی بود. نتایج آزمون mtt، نشان داد که سلول های تیمار شده با فاکتور رشد اپیدرمی بیان شده در این تحقیق، پس از گذشت 72 ساعت، به طور معنی داری درصد بقاء بیش تری نسبت به کنترل (0001/0< p). نشان دادند. استنتاج: به نظر می رسد که سیستم بیان سیتوپلاسمی به کار برده شده در این تحقیق، برای تولید فاکتور رشد اپیدرم انسانی نوترکیب زیست فعال کارامد باشد. روش ارائه شده در این تحقیق، روشی آسان، در دسترس، مقرون به صرفه و با بازده بالا برای محلول سازی کنجاله های نامحلول و به دست آوردن شکل زیست فعال فاکتور رشد اپیدرم انسانی می باشد.