همسانه سازی و بیان ژن زیر واحد اتصالی سم شبه شیگا نوع ۲ و بررسی ایمنی زایی آن در مدل حیوانی

rouhollah kazemi، department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb), tehran, iran asal akahavian tehrani، department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb), tehran, iran mahyat jafari، department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb), tehran, iran jafar amani، applied microbiology research center, baqiyatallah university of medical sciences, tehran, iran amir mousavi، department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb), tehran, iran ali hatef salmanian، department of plant bioproducts, institute of agricultural biotechnology, national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb), tehran, iran

چکیده

هدف: اشریشیا کلی انتروهموراژیک با قدرت تولید سم شبه شیگا نوع ۲ عامل اصلی اسهال خونی باکتریایی است. این عامل بیمازی‏زا در برخی موارد می تواند منجر به نشانگان اورمی همولیتیک و نارسایی کلیوی با درجه مرگ و میر بالا شود. تولید سم شبه شیگا نوع ۲ اصلی ترین عامل بیماری زایی سویه های اشریشیا کلی انتروهموراژیک است و از این رو خنثی سازی سم با آنتی بادی های سرمی اختصاصی به عنوان راه‏کار اصلی در روش های پیشگیری و درمان ضد نشانگان اورمی همولیتیک مطرح است. در این تحقیق، همسانه سازی، بیان پروتئین نوترکیب، خالص سازی و ایمنی زایی زیرواحد b سم شبه شیگا نوع ۲ (stx2b) که عامل اتصال سم به سلول های هدف است، شرح داده شده است. مواد و روش ها: ژن stx2b با استفاده از pcr تکثیر و در ناقل بیانی pet28a همسانه سازی و ناقل بیانی به اشریشیا کلی bl21-de3 منتقل شد. پروتئین نوترکیب rstx2b پس از ارزیابی بیان با استفاده از ستون نیکل خالص سازی شد. پروتئین rstx2b تخلیص شده به عنوان کاندید ایمنی زایی به روش زیرپوستی در سه مرحله به موش های نژاد balb/c تزریق شد. تولید آنتی بادی سرمی ضد rstx2b در خون موش های ایمن شده با استفاده از آزمون الایزا ارزیابی شد. خنثی سازی سم در شرایط آزمایشگاهی روی سلول های hela و در شرایط درون بدنی با آزمون چالش موش های ایمن با سم شبه شیگا نوع ۲ بررسی شد. نتایج: با بررسی میزان igg القا پاسخ ایمنی عمومی در موش های ایمن شده تأیید شد. نتایج آزمون سلول های hela نشان داد که سرم موش های ایمن قادر به خنثی سازی سم است. در آزمون چالش حدود ۷۰ درصد از موش های ایمن زنده ماندند. نتیجه گیری: نتایج نشان داد که پروتئین نوترکیب rstx2b می تواند منجر به القای پاسخ ایمنی خنثی کننده در موش شود و می تواند به عنوان یکی از اجزای اصلی واکسن علیه اشریشیا کلی انتروهموراژیک به کار برده شود.