ترانسداکشن لنتی ویروسی میکرو rnalet-۷f منجر به افزایش بیان ژن hnf۴a در سلول‏های بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی می‏شود

nahid davoodian، department of clinical biochemistry, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran abbas sahebghadam lotfi، department of clinical biochemistry, faculty of medical science, tarbiat modares university, tehran, iran masoud soleimani، department of hematology, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, iran seyed javad mola، department of genetics, faculty of biological sciences, tarbiat modares university, tehran, iran

چکیده

هدف: میکروrna ها، rna های غیر کد کننده‏ای است که به‏عنوان تنظیم کننده چندین فعالیت زیستی مثل متابولیسم، تکثیر و تنظیم سلولی عمل می‏کند. مطالعات اخیر نشان دهنده پتانسیل بالای این مولکول‏های کوچک در تمایز سلول‏های بنیادی به سلول‏های مشخص است. هدف از مطالعه حاضر ارزیابی اثر let-7f بر بیان ژن عامل هسته‏ای کبد (hnf4a) و عوامل خاص کبدی از جمله آلبومین، آلفا فیتوپروتئین، سیتوکراتین 18 و سیتوکراتین 19 در سلول‏های بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی است. مواد و روش‏ها: سلول‏های بنیادی جدا شده از بافت چربی تحت تأثیر آنزیم کلاژناز نوع i از بافت چربی انسانی استخراج شده و سپس با استفاده از لنتی‏ویروس‏های حاوی مهار کننده let-7f و scramble (کنترل منفی) ترانسداکت شدند. سپس تغییر در سطح بیان ژن‏های hnf4a، آلبومین، آلفا فیتوپروتئین، سیتوکراتین 18 و سیتوکراتین 19 در زمان‏های متفاوت با استفاده از روش real-time pcr بررسی شد. نتایج: کارآیی ترانسداکشن ناقل‏های لنتی ویروسی در سلول‏های بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی بیش از 80 درصد بود که با بررسی بیان پروتئین فلورسانت سبز ارزیابی شد. نتایج real-time pcr نشان داد که مهار let-7f در سلول‏های بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی منجر به افزایش معنی‏دار در بیان ژن‏های خاص کبدی در مقایسه با کنترل منفی می‏شود. همچنین بیان ژن hnf4a روز چهاردهم بعد از ترانسداکشن افزایش داشت که تأیید کننده سرکوب ژن hnf4a توسط let-7f است. نتیجه‏گیری: نتایج این تحقیق نشان داد که let-7f به‏عنوان یک تنظیم کننده منفی در بیان ژن hnf4a عمل می‏کند و مهار let-7f منجر به افزایش بیان نشانگرهای ویژه کبدی می‏شود. بنابراین مهار let-7f می‏تواند ابزار مؤثری در به راه‏اندازی تمایز سلول‏های بنیادی جدا شده از بافت چربی انسانی به سمت رده هپاتوسیتی باشد.