تولید igy در زرده تخم مرغ بر علیه اوره آز هلیکوباکتر پیلوری از قطعه نوترکیب urec

hossein basiri، student, department of biology, faculty of basic sciences, science and research branch of islamic azad university, tehran, iran seyed latif mousavi gargari، associated professor, department of biology, faculty of basic sciences, shahed university, tehran, iran iraj rasoli، professor, department of biology, faculty of basic sciences, shahed university, tehran, iran ali hatef salmanian، associated professor, national institute for genetic engineering and biotechnology, tehran, iran kazem parivar، professor, department of biology, faculty of basic sciences, science and research branch of islamic azad university, tehran, iran taher nejad satari، professor, department of biology, faculty of basic sciences, science and research branch of islamic azad university, tehran, iran

چکیده

هدف: هلیکوباکتر پیلوری یک باکتری گرم منفی مارپیچی شکل و میکروآئروفیل است که در لایه مخاطی معده انسان تکثیر یافته و ایجاد عفونت می نماید. عفونت ایجاد شده توسط این باکتری که با تخریب بافت پوششی معده همراه است، منجر به التهاب مزمن معده می شود که می تواند سبب ایجاد زخم های معده و دوازدهه شود. رویکردهای اخیر در راستای به کارگیری درمان های اختصاصی برای مقابله با این عفونت است که در این میان آنزیم اوره آز به عنوان یکی از مهم ترین عوامل بیماری زا و آنتی ژنیک این باکتری، هدف مناسبی برای این منظور است. هدف از مطالعه حاضرتولید igy اختصاصی بر علیه زیرواحد c آنزیم اوره آز است. مواد و روش ها: در این مطالعه ابتدا به منظور تهیه پروتئین نوترکیب زیرواحد c اوره آز، پس از کشت و تخلیص ژنوم باکتری، با کمک pcr، ژن زیرواحد c آنزیم اوره آز هلیکوباکتر پیلوری تکثیر و سپس روی ناقل بیانی pet28a کلون شد. پس از انتقال سازه نوترکیب به باکتری اشرشیاکلی زیرگونه bl21de3، پروتئین نوترکیب مورد نظر بیان شد. در ادامه پروتئین نوترکیب از طریق کروماتوگرافی میل ترکیبیni-nta تخلیص شد. در نهایت پس از تزریق پروتئین نوترکیب تخلیص شده به مرغ، تکمیل دوره ایمن سازی، جمع آوری تخم مرغ ها و جداسازی زرده تخم مرغ، igy با رسوب گذاری به کمک پلی اتیلن گلیکول تخلیص و با سنجش الایزا ارزیابی شد. نتایج: بررسی با sds-page نشان می دهد پروتئین نوترکیب به خوبی بیان و تخلیص شده است، همچنین نتایج به دست آمده با الایزا نشان دهنده ایمنی زایی بالای پروتئین نوترکیب و توان بالای آنتی بادی در شناسایی زیرواحدc آنزیم اوره آز است. بررسی با sds-page همچنین نشان می دهد، تخلیص igy با خلوص بیش از 70 درصد انجام شده است. نتیجه گیری: با توجه به توان بالای آنتی بادی igy-hpuc در شناسایی زیرواحد urec آنزیم اوره آز، امکان استفاده از این آنتی بادی به صورت خوراکی به منظور محدود کردن رشد و توسعه عفونت هلیکوباکتر پیلوری مطرح می شود.