طراحی و ساخت وکتور خودکشی pds۱۳۲-δkanr به منظور حذف ژن مقاومت به آنتی-بیوتیک کانامایسین در بروسلا ملی تنسیس سویه rev۱ جهش یافته برای تولید سویه کاندید واکسن
چکیده
زمینه و اهداف: بروسلوز از مهم ترین بیماری های مشترک انسان و دام محسوب می گردد. بهترین راه مقابله با بروسلوز انجام واکسیناسیون مناسب میباشد. واکسنهای موجود از قبیل واکسن rev1 با معایبی چون سقط جنین در حیوانات باردار همراه است لذا تهیه واکسن مناسب برای درمان بروسلوز ضروری می باشد. هدف از انجام این مطالعه، طراحی و ساخت وکتور خودکشی pds132-δkanr به منظور حذف ژن مقاومت به آنتیبیوتیک کانامایسین در بروسلا ملیتنسیس سویه rev1 جهشیافته برای تولید سویه کاندید واکسن بود. مواد و روش کار: در این مطالعه برای حذف ترادف هدف، تصمیم به استفاده از پلاسمید pds132 به عنوان وکتور خودکشی گرفته شد. بمنظور ساخت کاست حذف، پس از طراحی و سنتز جداگانه قطعات دارای همولوژی با ترادفهای هدف، این قطعات جهت ساخت قطعه واحد، با استفاده از آنزیمهای محدودگر مناسب در وکتور pbluescriptsk(-) کلون شد. سپس به منظور ساخت وکتور خودکشی، قطعه کاست حذف با استفاده از آنزیم های محدودگر مناسب از وکتور فوق جدا و در وکتور pds132 ساب کلون شد. یافته ها: وکتور خودکشی pds132-δkanr با در برداشتن 590 جفت باز از توالی بالادست و 421 جفت باز از توالی پاییندست ترادف هدف میتواند به عنوان یک ناقل خودکشی اختصاصی در ایجاد تداخل در ژن kanr در ژنوم باکتریبروسلا ملیتنسیس سویه rev1 جهش یافته موجب حذف مقاومتآنتی بیوتیکی در آن بشود. نتیجه گیری: استفاده از سیستم خودکشی مورد نظر با استفاده از وکتور pds132-δkanr، ایجاد جهش هدفمند را تسهیل و در مقایسه با سایر روش های خودکشی وابسته به مارکر مثبت و نیز روش های ابتدایی مانند پاساژ متوالی، روش موثرتری میباشد.