ساخت وکتور minicircle حاوی ژن مقاومت به پورومایسین
چکیده
وجود توالی های باکتریایی در پلاسمید های معمول علاوه بر ایجاد مشکلات ایمنی سبب کاهش بیان ژن می گردد. وکتورهای minicircle وکتورهایی خارج کروموزومی وفاقد توالی های باکتریایی می باشند. این وکتور ها به واسطه یک نوترکیبی درون مولکولی توسط یک ریکامبیناز از پلاسمید والدی ساخته می شوند. در این مطالعه یک حامل minicircle حاوی ژن مقاومت به پورومایسین ساخته شد. به این منظور ابتدا یک پلاسمید والدی ساخته شد که حاوی ژن اینتگرازфc31 قابل کنترل با پروموتر قابل القای arabad ، توالی های attp وattb اختصاصی ژن اینتگرازфc31 در دو طرف ژن puro و توالی های لازم برای بیان آن ، یک شاخص انتخابی برای غربالگری در باکتری ها وتوالی شروع برای همانندسازی در باکتری می باشد. با القای بیان اینتگرازتوسط آرابینوز، فرآیند نوترکیبی توسط اینتگراز صورت گرفت و minicircle حاوی ژن puro در باکتریe.coli ساخته شد. با توجه به بیان بالا وعدم الحاق وکتور ها ی minicircle در ژنوم، وکتورminicircle تولید شده در این مطالعه ابزار مناسبی برای غربالگری سلول ها به منظور ایجاد رده های سلولی پایدار می باشد.