بررسی بیان توالی کامل ژن گلیکوپروتئین سطحی 2 ویروس هپاتیت c در مخمر پیکیا پاستوریس
چکیده
سابقه و هدف: عفونت ویروس هپاتیت c با اتصال پروتئینe2 ویروس به گیرنده سطح سلول کبد انسان آغاز می شود. بنابراین به عنوان یکی از اهداف تحقیقات دارو و واکسن بر علیه این عفونت مطرح می باشد. این مطالعه برای اولین بار در ایران با هدف انتقال تمام طول ژن hcv-2a (jfh1) e2 توسط وکتور نوترکیب e2-ppiczaa به مخمر پیکیاپاستوریس سویه km71h و بیان ژن یاد شده در این سیستم بیانی انجام شد. مواد و روش ها: ژنe2 با پرایمرهای واجد جایگاه آنزیم های برش دهنده ecori و xbai به طور تمام طول تکثیر شد. این ژن به وکتورهای t-ptg19 وppiczaa وارد و سپس به باکتری اشریشیا کلی منتقل گردید. وکتور نوترکیب ppiczaa-e2 با روش الکتروپوریشن به مخمر منتقل شد. انتقال توسط هضم آنزیمی و تعیین توالی بررسی گردید. مخمر به مدت 5 شبانه روز در محیط کشت بیانی ynb متانول دار رشد کرد و بیان ژن مورد نظر با روش وسترن بلات بررسی شد. یافته ها: ساخت وکتور نوترکیب واجد ژن تمام طول ppiczaa-(jfh1) e2، انتقال به میزبان های باکتریایی و مخمری و نیز بیان ژن در سیستم مخمری km71h با موفقیت انجام شد. نتیجه گیری: در این پژوهش امکان بیان ژن تمام طولe2 ویروس هپاتیت c سویه jfh1 (به عنوان سویه مدل در تحقیقات بر روی این ویروس) با موفقیت انجام گرفت. نتایج این مطالعه می تواند راه گشای پژوهش های آینده جهت بررسی ساختار و عملکرد این پروتئین باشد.
نویسندگان و وابستگی سازمانی
- راحله صولت — کارشناس ارشد، دانشگاه پیام نور، واحد تهران شرق، دانشکده علوم پایه، گروه زیست شناسی
- پونه رحیمی — استادیار، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران ، گروه ویروس شناسی
- غلامرضا بخشی خانیکی — استاد، دانشگاه پیام نور، واحد تهران شرق، دانشکده علوم پایه، گروه زیست شناسی
- محمدرضا آقاصادقی — دانشیار، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، گروه ویروس شناسی
- روح الله وهاب پور — دانشجوی دکتری تخصصی، بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران