Article

کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین snap-۲۵

سید لطیف موسوی، sl mousavi شهرام نظریان، sh nazarian جعفر امانی، j amani رحیم سروری زنجانی، r sorouri zanjani

Download full textFree with an account; signing up with Google takes seconds

Abstract(in Persian; no English abstract is available)

چکیده زمینه و هدف: سم های عصبی کلستریدیوم آزادسازی نوروترانسمیترها را به وسیله ی پروتئولیز اختصاصی و انتخابی snap-25 ، سیناپتوبروین vamp و سینتاکسین، مهار می کنند. پروتئین snap-25 یکی از پروتئین های تشکیل دهنده ی مجموعه ی لنگراندازی (docking complex) در پایانه های عصبی است. این پروتئین سوبسترای سم عصبی بوتولینوم، سروتیپ های a ،c و e می باشد. هر کدام از این سروتیپ ها به طور اختصاصی و در جایگاه ویژه snap-25 را در یک پیوند آمیدی برش داده و از تشکیل مجموعه ی لنگراندازی و در نهایت اگزوسیتوز نورترانسمیترها و انتقال پیام عصبی جلوگیری می کنند. در آزمایشگاه می توان با تولید snap-25 به روش نوترکیب از آن به عنوان سوبسترای سم، در تشخیص تیپ های e وa سم بوتولیسم بهره برد. روش بررسی: در این مطالعه بر آن شدیم که این پروتئین را به صورت نوترکیب تولید کنیم. برای این منظور cdna ژن مورد نظر با استفاده از روش از rna تام استخراج شده از سلول های مغز موش صحرایی تهیه و توسط rt-pcr تکثیر شد. محصول pcr روی ناقل pet32a همسانه سازی شد و پروتئین نوترکیب بیان شده به کمک روش وسترن بلاتینگ و با استفاده از آنتی بادی اختصاصی مورد تأیید قرار گرفت و در نهایت با استفاده از یک ستون کروماتوگرافی میل ترکیبی (ni-nta) تخلیص و با کمک آنزیم اینتروکیناز فیوژن از پروتئین مورد نظر جدا شد. یافته ها: در این تحقیق شرایط بهینه برای بیان پروتئین نوترکیب snap-25 ، استفاده از غلظت یک میلی مولار iptg ، مدت زمان انکوباسیون 5 ساعت در دمای 37 درجه ی سانتی گراد تعیین شد. در تخلیص پروتئین نوترکیب با استفاده از ستون ni-nta ، غلظت 250 میلی مولار ایمیدازول باعث جداسازی و تخلیص پروتئین نوترکیب شد. هم چنین استفاده از آنزیم اینتروکیناز برای برش فیوژن در دمای 37 درجه ی سانتی گراد نسبت به دمای محیط نتایج بهتری را به همراه داشت. نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب تخلیص شده ساختار خود را در حین تخلیص از دست نداده و جهت برش و انجام آزمایشات بعدی مناسب و قابل استفاده می باشد. از آن جا که سایر روش های تشخیصی سم بوتولیسم از جمله روش استاندارد تزریق به موش بسیار وقت گیر می باشند لذا استفاده از این محصول نوترکیب به عنوان سوبسترا جهت تشخیص سم در آزمایشگاه می تواند تا اندازه ای مشکلات موجود در روش های قبلی را مرتفع سازد.

Similar items

  • کلونینگ،بیان، تخلیص و بررسی فعالیت ضد استافیلوکوکی پروتئین لیزوستافین اولیه در شرایط آزمایشگاهی

    Articleکومشلیلا فرهنگ نیا، leila farhang nia biotechnology laboratory,dept. of biotechnology and microbiology, faculty of medicine, arak university of medical sciences, arak, iran1- دانشگاه علوم پزشکی اراک، دانشکده پزشکی، گروه بیوتکنولوژی و میکروبیولوژی، آزمایشگاه بیوتکنولوژی احسان الله غزنوی راد، ehsanollah ghaznavi rad dept .of microbiology, faculty of medicine, arak university of medical sciences, arak, iran2- دانشگاه علوم پزشکی اراک، دانشکده پزشکی،گروه میکروب شناسیو ایمنی شناسی ندا مولایی، neda molaee molecular and medicine research center, faculty of medicine, arak university of medical sciences, arak, iran3- دانشگاه علوم پزشکی اراک، دانشکده پزشکی،مرکز تحقیقات پزشکی ومولکولی حمید ابطحی

    سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس عامل طیف وسیعی از عفونت ها،از عفونت های پوستی تا انتشار آن وعفونت های سیستمیک منجر شونده به نارسایی ارگانی ومرگ می باشد.مقاومت دارویی در این گروه از پاتوژن ها یک نگرانی جهانی شده و نیازمند توسعه ی عوامل درمانی جدیداست. لیزوستافینیک نمونه از این عوا

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین SNAP-25

    Article2007مجله دانشگاه علوم پزشکی زنجانسید لطیف موسوی، شهرام نظریان، جعفر امانی، رحیم سروری زنجانی

    Background & Objectives: Clostridial neurotoxin inhibits neurotransmitter release by selective and specific intracellular proteolysis of synaptosomal associated protein of 25KDa (SNAP-25), synaptobrevin/VAMP-2 and syntaxin. SNAP-25 is one of the components that forms docking comp

  • کلونینگ،بیان، تخلیص و بررسی فعالیت ضد استافیلوکوکی پروتئین لیزوستافین اولیه در شرایط آزمایشگاهی

    Article2014کومشابطحی, حمید، غزنوی راد , احسان الله، فرهنگ نیا, لیلا، مولایی, ندا

    سابقه و هدف: استافیلوکوک اورئوس عامل طیف وسیعی از عفونت‌ها،از عفونت‌های پوستی تا انتشار آن وعفونت‌های سیستمیک منجر‌شونده به نارسایی ارگانی ومرگ می‌باشد.مقاومت دارویی در این گروه از پاتوژن‌ها یک نگرانی جهانی شده و نیازمند توسعه‌ی عوامل درمانی جدیداست. لیزوستافینیک نمونه از این عوا

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین SNAP-25

    Article2007مجله دانشگاه علوم پزشکی زنجانامانی, جعفر، سروری زنجانی, رحیم، موسوی, سید لطیف، نظریان, شهرام

    Background & Objectives:Clostridial neurotoxin inhibits neurotransmitter release by selective and specific intracellular proteolysis of synaptosomal associated protein of 25KDa (SNAP-25), synaptobrevin/VAMP-2 and syntaxin. SNAP-25 is one of the components that forms docking compl

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی

    Articleمجله دانشگاه علوم پزشکی اراکسمیه کدخدایان، somayeh kadkhodayan department of biology, sciences and research branch, islamic azad university, tehran, iran.گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران. شیوا ایرانی، shiva irani department of biology, science and research branch, islamic azad university, tehran, iranگروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) سید مهدی سادات، seyed mehdi sadat department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran, iran.بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) فاطمه فتوحی

    زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی

    Articleمجله میکروب شناسی پزشکی ایرانفاطمه کرپی، fatemeh korpi department of microbiology, international branch of iran university of medical sciences, tehran, iranگروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایران ، تهران ، ایران. بهادر بهروز، bahador behrouz department of microbiology, tehran university of medical sciences, tehran, iranگروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران ، ایران. محمد معتمدی فر، mohmmad motameifar department of bacteriology and virology, shiraz university of medical sciences, shiraz, iranگروه باکتری شناسی و ویروس شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران غلامرضا ایراجیان

    زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ها: ژن کد کننده پیلین (pila) از سویه pao1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله pcr جدا گردید