جداسازی و کلونینگ ژن ایزوفلاون سنتتاز از گیاه سویا رقم ویلیامز iii
Abstract(in Persian; no English abstract is available)
ایزوفلاونوییدها، دستهای از ترکیبات فلاونوییدی هستند که با استفاده از آنزیم ایزوفلاون سنتاز از پیشماده فلاوانونی در گیاهان لگوم تولید میشوند. مهمترین ایزوفلاونهای موجود در گیاه سویا شامل: جنیستین و دیدزین میباشند که خواص دارویی زیادی دارند. تحقیقات نشان میدهد که مصرف مرتب این ترکیبات خطر ابتلا به سرطانهای وابسته به هورمونهای جنسی را کاهش داده و کاهش علایم یائسگی، پوکی استخوان، تعدیل کلسترول خون، بهبود بیمایهای کرونری قلبی و غیره همگی از مزایای استفاده از این ترکیبات میباشد. در این پژوهش بهمنظور جداسازی ژن 2- هیدروکسی ایزوفلاوانون سنتاز (ifs) ابتدا rna کل از سویا جداسازی شده و کتابخانه cdna ساخته شد. ژن ifsبا پرایمرهای اختصاصی با مکانهای برشی hindiii و xbai از طریق pcr تکثیر گردید و سپس ژن تکثیر شده با اندازه 1566 جفت بازی پس از خالصسازی از روی ژل در مکان xbai/hindiii در ناقل بیانی pet28a+ کلون شد. سپس پلاسمید نوترکیب به استرینxli-blue باکتری e. coli منتقل گردید. وجود ژن ifs در پلاسمیدهای نوترکیب با دو روش pcr و هضم آنزیمی مورد تائید قرار گرفت. در نهایت، حامل مذکور را میتوان برای بیان در داخل پروکاریوت یا با سابکلون کردن مجدد برای انتقال ژن به گیاهان مختلف با روش اگروباکتریوم و تفنگ ژنی مورد استفاده قرار داد.