تعیین توالی ژن، کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آیروجینوزا سویه sn۴ در اشریشیاکلی
Abstract(in Persian; no English abstract is available)
مقدمه: ال- آسپاراژیناز جایگاه با ارزشی از جنبه کاربردهای پزشکی و صنایع غذایی دارد. تقاضا برای این آنزیم دارویی هرساله چندین برابر میشود. مواد و روشها: در این پژوهش، یک آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه sn4، تعیین توالی و در اشریشیاکلی کلون شد. پرایمرها بر اساس آل- آسپاراژیناز از سودوموناس ایروجینوزا سویه dsm50071 طراحی شدند که بر اساس توالی ژن 16s rrna شباهت بالایی را نسبت به سویه sn4 نشان میداد. ژن آسپاراژیناز در معرض هضم آنزیمی توسط آنزیمهای برشی ndei و xhoi قرار گرفت و سپس، به داخل پلاسمید pet21a الحاق شد. محصول الحاق به درون سلول‌های مستعد e. coli (de3) plyss dh5a با روش cacl2 ترانسفورم شد. سلول‌های e. coli ترانسفورم شده در محیط lb آگار حاوی 100 میکروگرم/ میلیلیتر آمپیسیلین و iptg (1mm) رشد داده شدند. نتایج: ال-آسپاراژیناز نوترکیب در باکتری bl21 e. coli پس از 9 ساعت انکوباسیون، به میزان بالایی القا شد و فعالیت آسپاراژینازی بالایی به میزان 4/93 واحد در میلیلیتر را نشان داد. ال- آسپاراژیناز نوترکیب تعیین توالی شد و نتایج همردیفی نشان داد که توالی پیشنهادی اسید آمینهایی آن از 350 اسید آمینه تشکیل شده که شباهت بالایی با ال- آسپاراژینازهای سایر سودوموناس ایروجینوزها در حدود 99 درصد را نشان میدهد. نتایج نشان میدهد که آل- آسپاراژیناز sn4، باقیماندههای کاتالیزی و نواحی حفظ شده مشابه با سایر آسپاراژینازها را داراست. بحث و نتیجهگیری: پژوهش حاضر نخستین گزارش در مورد کلونینگ و بیان آل- آسپاراژیناز نوترکیب از سودوموناس آایروجینوزا در اشریشیاکلی است که منبع بالقوهایی از ال- آسپاراژیناز را برای بررسی اثر ضدسرطانی آن هم در شرایط آزمایشگاه و هم در موجود زنده فراهم میکند.