جداسازی و کلونینگ ژن نورآمینیداز ویروس آنفلوانزا a (h۱n۱ سویهnew caledonia ) در وکتور بکمید به منظور ساخت باکیولوویروس نوترکیب

سارا نجفی، sarah najafi department of microbiology, faculty of biological sciences, islamic azad university, zanjan, iran ,postal code : 45156-58145گروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه و پزشکی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد زنجان، زنجان، ایران فریدا بهزادیان، farida behzadian research center for biotechnology, babaei highway,shabanlu street, lavizan, p.o.box 15875-1774پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، اتوبان شهید بابایی، خیابان شهید شعبانلو، لویزان، صندوق پستی 1774-15875سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی زنجان (islamic azad university of zanjan) فاطمه فتوحی، fatemeh fotuhi 3influenza unit, department of virology, pasteur institute of iran, tehran, iran , postal code: 1316943551انستیتو پاستور ایران، مرکز تحقیقات آنفلوانزا، تهران، ایران جلیل فلاح مهرآبادی، jalil fallah mehrabadi 1department of microbiology, faculty of biological sciences, islamic azad university, minoodasht, iranگروه میکروبیولوژی، دانشکده علوم پایه، دانشگاه آزاد اسلامی واحد مینودشت، مینودشت، ایرانسازمان اصلی تایید شده: انستیتو پاستور ایران (pasteur institute of iran)

Abstract(in Persian; no English abstract is available)

زمینه و هدف: در سال‎های اخیر ویروس آنفلوانزا باعث عفونت‎های متوسط تا شدید با میزان پراکندگی وسیع در سرتاسر دنیا شده است. بر این اساس، واکسن آنفلوانزایی که تنها یک دوز آن محافظت ایجاد نماید هنوز در دسترس نیست. بنابراین، تهیه یک واکسن عمومی و فراگیر بر اساس ذرات شبه ویروسی غیرتکثیری ایده‎ال می‎باشد. در تحقیق حاضر یکی از سازه‎های مولکولی برای ساخت این ذرات مد نظر قرار گرفته است. مواد و روش‎ها: در این مطالعه تجربی، رده سلولی mdck برای تکثیر ویروس آنفلوانزای انسانی تیپ a/new caledonia h1n1 استفاده شد. سپس کل rna سلول، استخراج شده و با استفاده از پرایمر random hexamer به عنوان پرایمر عمومی cdna ساخته شد. قطعه (1413 bp)na با روش pcr تکثیر داده شد و در وکتور pbluescript sk کلون شد. سپس قطعه نورآمینیداز در پلاسمید pfastbac11 از طریق محل‎های برش آنزیمی sali و xhoi ساب‎کلون گردیده و صحت آن با توالی‎یابی دو طرفه مورد تایید قرار گرفت. وکتور pfastbac1na به میزبان e.coli dh10bac که حاوی بکمید و پلاسمید کمکی بود منتقل شد تا بکمید نوترکیب نورآمینیداز ساخته شود. یافته‎ها: بکمید نوترکیب نورآمینیداز با روش نوترکیبی هومولوگ بین pfastbac1na و بکمید به وجود آمد. این محصول با استفاده از pcr و پرایمرهای اختصاصی نورآمینیداز و عمومی m13 تایید گردید. نتیجه‎گیری: از بکمید نوترکیب ساخته شده در این مطالعه به همراه بکمیدهای نوترکیب، حاوی سایر ژن‎های ساختمانی ویروس، می‎توان برای ساخت ذرات شبه ویروسی آنفلوانزا استفاده نمود و یا پروتئین حاصل از بیان این سازه را در سلول‎های حشرات خالص نموده و در تحقیقات واکسن شناسی استفاده نمود.