خالص سازی توکسین اپسیلون از سویه واکسینال کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ d با استفاده از کروماتوگرافی تبادل یون و ژل فیلتراسیون

احسان زایرزاده، احمد رضا جباری، محمد کاظم کوهی، گودرز صادقی هشجین، زینب قاسم پورآبادی

Abstract(in Persian; no English abstract is available)

باکتری کلستریدیوم پرفرنژنس تیپ d در بره­ها، گوساله­ها، کره اسب­ها، بچه خوک­ها و جوجه­ها باعث ایجاد بیماری انتروتوکسمی یا pulpy kidney می شود. هم­چنین در انسان، عامل بیماری enteritis necroticans می باشد. مهم­ترین توکسین تیپ d توکسین اپسیلون است. این توکسین به عنوان مهم­ترین فاکتور ویرولانس باکتری کلستریدیوم پر فرنژنس تیپ d در بیماری­زایی به شمار می­رود. در مطالعه­ی حاضر، عملیات خالص­سازی توکسین اپسیلون با استفاده از تکنیک­های مختلف کروماتوگرافی نظیر کروماتوگرافی تعویض کاتیون cm-sepharose و ژل فیلتراسیون sephadex-g100 با هدف ابداع روشی جدید و اقتصادی به منظور خالص­سازی توکسین اپسیلون انجام شد. پس از کشت باکتریایی، mld نمونه­ی حاصل از کشت باعث مرگ موش­ها تا رقت 8000/1 گردید. هم­چنین نمونه­ی کشت اولیه باعث مرگ سلول­های mdck در کشت سلولی شد. بهترین غلظت نمک سولفات آمونیوم جهت ترسیب و تغلیظ نمونه­ی کشت باکتریایی 60 درصد تعیین شد. پس از عملیات ترسیب، تغلیظ و دیالیز، نمونه­ی خام روی کروماتوگرافی تعویض کاتیون cm-sepharose بارگذاری شد. توکسین اپسیلون در غلظت نمک 100 میلی­مولار خارج گردید. توکسین اپسیلون بر اساس فعالیت توکسین در مراحل مختلف خالص­سازی حدود 9/138 برابر خالص شد. وزن مولکولی این توکسین حدود 34 کیلو دالتون تعیین گردید. با توجه به یافته­های این تحقیق، روش­های استفاده شده در عملیات خالص­سازی این توکسین مناسب می باشد و توکسین به دست آمده دارای میزان فعالیت و درجه­ی خلوص مناسبی است.