تهیه سازه حاوی توالیهای omega و sar جهت افزایش بیان ژن گزارشگر gus در بذر
Abstract(in Persian; no English abstract is available)
از مهمترین فاکتورهای محدود کننده تولید پروتئنیهای نوترکیب در گیاهان، پائین بودن سطح بیان ژنهای وارد شده است. انتخاب بافت مناسب گیاه جهت بیان و نیز بهبود تظاهر قطعه ژنی از جمله راههای افزایش بیان ژن منتقل شده به گیاه می باشد. در این پژوهش با طراحی و تهیه سازه اختصاصی بذر به همراه قطعات افزاینده بیان ژن (omeg و sar) سعی شده است تا ضمن بیان اختصاصی ژن مدنظر در بذر گیاه، افزایش بیان قطعه ژنی را نیز شاهد باشیم. توالی omega مورد استفاده به عنوان یک تنظیم کننده ترجمه عمل می کند و کارایی ترجمه را بالا می برد و توالی sar با مکانیزم های مختلف می تواند از خاموشی ژن منتقل شده ممانعت بعمل آورد. در این تحقیق از قطعه ای به نام ps206-1 به عنوان sar استفاده گردید. در ابتدا با طراحی آغازگرهای اختصاصی وانجام واکنش pcr قطعه omega به ابتدای ژن gus متصل شد. قطعه ی sar (ps206-1) نیز از ژنوم گیاه توتون جداسازی گردید. سپس دو قطعه با استفاده از روش soeing pcr به هم متصل شدند به نحوی که توالی omega در بالادست ژن gus و توالی sar در پائین دست آن قرار گرفت. قطعه ی ترکیبی حاصله با سایز مورد انتظار، در ناقل ta همسانه سازی شد و صحت انجام کار با استفاده از روش های کلنی pcr، هضم آنزیمی و توالی یابی مورد تایید قرار گرفت. در مرحله بعد ساب کلونینگ در وکتور گیاهی pbi121 که در آن پیشبر camv35s با پیشبر اختصاصی بذر جایگزین شده بود، انجام شد.