تولید پروتئین نوترکیب آمیلوپلولاناز coh01133 از باکتری کوهنلا
Abstract(in Persian; no English abstract is available)
با توجه به نیاز گستردهی صنایع غذایی به انواع شیرین کنندههای حاصل از هیدرولیز نشاسته همچون شربتهای گلوکز، مالتوز و فروکتوز، استفاده از آنزیم‌های هیدرولیز کنندهی نشاسته اهمیت ویژهای پیداکرده است. آنزیم آمیلوپلولاناز (ec 3.2.1.41) یکی از اعضای خانوادهی آلفاآمیلازهاست که، قادر به هیدرولیز پیوندهای α-(1→4) و α-(1→6) در نشاسته، پلولان و دکسترین میباشد. dna ژنومی از باکتری کوهنلا استخراج شد. طراحی پرایمر از دو توالی از ژنهای کد کنندهی آنزیم آمیلوپلولاناز در این باکتری با نامهای coh00831 به طول bp 1998 و coh01133 به طول bp 3678 صورت گرفت. ژن coh00831 ابتدا در ناقل کلونینگ pgem-t همسانهسازی شد. سپس در ناقل بیانی pet28a کلون، و در میزبان بیانی bl21 (de3) با القاء (m 1/0) iptg در °c 22 به مدت 6 ساعت بیان گردید. ژن coh01133 نیز پس از هضم آنزیمی با آنزیم‌های مهندسی شده در دو سر ژن، در ناقل بیانی pet28a کلون و در میزبان بیانی bl21 (de3) با القاء (m 1/0) iptg در °c 25 به مدت 4 ساعت بیان شد. پس از خالص سازی و سنجش فعالیت آنزیم‌ها، مطالعات بیوانفورماتیکی به منظور بررسی خصوصیات بیوشیمیایی و شناسایی دمینهای کاتالیتیکی و غیر کاتالیتیکی توالیها نیز صورت گرفت.