باززایی و امکان انتقال ژن گزارشگر gus و مهندسی متابولیک در مسیر زیست ساخت آنتوسیانین ها در گل ژربرا
Abstract(in Persian; no English abstract is available)
گل ژاله (ژربرا) یکی از مهم ترین گیاهان زینتی محبوب در جهان بوده و در صنعت گلکاری رتبه پنجم را در بین 10 گل بریدنی برتر دارد. در این پژوهش 2 آزمایش در زمینه ریزافزایی و 3 آزمایش در زمینه انتقال ژن به طور جداگانه روی گل ژاله رقم ‘royal soft pink’ در ایران و ژاپن انجام شد. آزمایش اول با هدف بررسی اثر مقادیر مختلف (1، 2 و3 میلی گرم در لیتر) بنزیل آدنین (ba) به تنهایی و در ترکیب با 2 غلظت (2/0 و 4/0 میلی گرم در لیتر) نفتالن استیک اسید (naa) برای انگیزش، افزونگری و پرآوری شاخساره از ریزنمونه های نوک شاخه در محیط کشت ms انجام شد. پس از 2 زیر کشت شاخه های پرآوری شده، بیشترین شمار شاخه (10 عدد در هر ریزنمونه) در محیط کشت ms دارای 2 میلی گرم در لیتر ba و 2/0 میلی گرم در لیتر naa به دست آمد. آزمایش دوم به منظور اندام زایی مستقیم شاخه از ریزنمونه های برگ همراه با دمبرگ با بهره گیری از محیط کشت ms دارای 1/0 میلی گرم در لیتر ایندول استیک اسید (iaa) همراه با ترکیب ها و غلظت های مختلف تیدیازورون (tdz) و بنزیل آدنین (ba) انجام شد. نتایج نشان داد که آمیخته tdz و ba اثر معنی داری بر باززایی مستقیم شاخه در مقایسه با بهره گیری از هر کدام به تنهایی دارد. بیشترین درصد باززایی مستقیم شاخه (43/85%) و بیشترین شمار شاخه در هر ریزنمونه (88/12)، در محیط کشت دارای 1/0 میلی گرم در لیتر iaa همراه با 1 میلی گرم در لیتر tdz و 4 میلی گرم در لیتر ba به دست آمد. آزمایش سوم در2 مرحله انجام شد، ابتدا در 12 رقم گل ژاله به رنگ های مختلف آزمایش اگرواینفیلتریشن با 3 سازه ژنی رنگ گل (pbih-35s-ccf3´5´h، pbih-35s-del2 و pbih-35s-del8) انجام شد. مشاهده ظاهری نشان داد که رقم های به رنگ صورتی دارای تغییر رنگ گل به سمت آبی و تولید آنتوسیانین دلفینیدین هستند. سپس این آزمایش برای بار دوم با 4 رقم به رنگ صورتی و با همان سازه ها تکرار شد. نتایج واکاوی hplc 4 نوع آنتوسیانین دلفینیدین، سیانیدین، پلارگونیدین و پئونیدین نشان داد که، گلبرگ های تزریق یافته رقم ‘bismarck’ با سازه ژنی pbih-35s-del8 بیشترین مقدار دلفینیدین را تولید کردند. در آزمایش چهارم انتقال ژن بتاگلوکورونیداز (gus) به گل ژاله از طریق هم-کشتی ریزنمونه های دمبرگ دارای پهنک با آگروباکتریوم نژاد eha101 و دارای پلاسمید pig121-hm انجام شد.