مقایسه ملکولی ژنوم ویروس هرپس سیمپلکس نوع 1 جداشده از بیماران ایرانی با سوش خارجی kos از طریق ازدیاد ژن dna پلی مراز (ul30)
چکیده
ویروس هرپس سیمپلکس از خانواده هرپس ویریده می باشد که عامل تبخال در انسان است و به دلیل گسترش و شیوع منحصر به فرد در جمعیت های انسانی بسیار مورد توجه می باشد. در طول 25 تا 30 سال گذشته در کشورهای مختلف تحقیقات بسیاری روی بیولوژی ملکولی و پاتوژنز این ویروس صورت گرفته است. از جمله در ژاپن ایزوله های ژاپنی را یافته اند که از نظر rflp با هم مشابه بوده اما با ایزوله های سایر کشورها تفاوت دارند. نتایج مشابه در سایر کشورها تفاوت معنی داری در مناطق برش آزنیمی ژنوم این ویروس در نواحی مختلف جغرافیایی و نژادهای مختلف نشان می دهد. بررسی پلی مورفیسم برخی از ژن های ضروری ویروس مانند ژن تیمیدین کیناز منجر به یافتن سوش های مقاوم به داروی آسیکلوویر شده است. در ایران ژنوم این ویروس از لحاظ ملکولی بررسی نشده است و هدف اصلی این تحقیق بررسی ملکولی ژنوم است. بدین منظور dna را بعد ازعفونت سلول های vero، با روش فنل-کلروفرم استخراج نموده و بوسیله نشانگر ساخته شده از پلاسمید pnn2 (حاوی ژن dna پلی مراز سوش خارجی kos) ساترن بلات انجام شد. نتیجه مثبت آزمایش تاییدی بر وجود تیپ 1 این ویروس است. ژن dna پلیمراز یکی از ژن های ضروری ویروس است که برخی جهش ها در این ژن باعث مقاومت به داروی آسیکلوویر می شود. برای تکثیر این ژن، پرایمرهای ویژه pcr طراحی شد. محصول pcr توسط چند آنزیم محدودگر برش داده شد که نقشه هضم آنزیمی چهار آنزیم hinf,haeiii,xhoi<ecori در ایزوله ایرانی با سوش خارجی تشابه نشان داد که این خود تایید ملکولی برای ویروس ایرانی می باشد. از طرفی نقشه هضم آنزیمی ایزوله های ایرانی برای آنزیم dpni نسبت به سوش خارجی تفاوت نشان داد. اگر این تفاوت در سایر ایزوله های ایرانی نیز مشاهده شود می توان از آن به عنوان مارکر تشخیصی برای ایزوله های ایرانی استفاده کرد و نیز با تحقیقات زیادتر می توان سوش های مقاوم به داروی آسیکلوویر را یافت.