همسانه سازی ژن تیوردوکسین h از گیاه انگور (.vitis vinifera l)
چکیده
تیوردوکسین ها (trxs) پروتئین های کوچکی هستند که به فراوانی در تمام موجودات زنده از پروکاریوت ها تا یوکاریوت های عالی یافت می شوند. آنها از طریق دو اسید آمینه سیستئین موجود در جایگاه فعالشان در واکنش های تیول- دی سولفید شرکت کرده و قادر به احیاء پیوندهای دی سولفید در پروتئین های هدف می باشند. تیوردوکسین ها براساس ساختارهای اولیه پروتئینی و نحوه قرارگیری در اندامک های سلولی، به گروه ها و زیر گروه های مختلفی تقسیم بندی شده و نقش های مهم و کلیدی را در جنبه های مختلف متابولیسم سلولی ایفا می کنند، از جمله: محافظت سلولی در برابر تنش اکسیداتیو، تنش خشکی و عوامل بیماریزای باکتریایی. در این تحقیق، پس از استخراج rna کل از بافت های مختلف گیاه انگور (vitis vinifera l.) ارقام بیدانه سفید، بیدانه قرمز و عسگری و سپس سنتز cdna، ژن تیوردوکسین h، تحت عنوان vvtrxh، با استفاده از تکنیک واکنش زنجیره ای پلیمراز نسخه برداری معکوس (rt-pcr) استاندارد، از بافت حبه هر سه رقم جداسازی و در ناقل پلاسمیدی puc19 همسانه سازی شدند. در نهایت، ژن تیوردوکسین h از بافت حبه رقم بیدانه سفید، به ناقل دوگانه pbi121 متصل گردیده و به اگروباکتریوم تومفاسینس، جهت انتقال به گیاه، منتقل شد. نتایج توالی یابی و بررسی ها با نرم افزار blastنشان داد که ژن های همسانه سازی شده، تیوردوکسین h بوده و در ارقام بیدانه سفید (vvtrxh6) و عسگری (vvtrxh7) و همچنین ژن تیوردوکسین h جداسازی شده از بافت برگ رقم بیدانه سفید (vvtrxh8) حاوی یک چارچوب باز خواندنی منفرد به طول bp345 می باشند که یک پروتئین با 114 اسید آمینه را کد می کنند. هر سه ژن vvtrxh6، vvtrxh7 و vvtrxh8حاوی جایگاه فعال معمول wcgpc، اسید آمینه تریپتوفان ویژه (w) و یک موتیف ساختاری درگیر در انتقال سلول به سلول در انتهای آمینوی (maee) خود می باشند. بررسی های ترتیب توالی با استفاده از نرم افزار clustalw، شباهت زیادی را بین توالی های پروتئینی پیش بینی شده این ژن ها با ژن مورد نظر در بانک ژن ncbi و با تیوردوکسین h سایر گیاهان نشان داد. همچنین بررسی فیلوژنتیکی به روش دندروگرام با استفاده از نرم افزار clustalw نشان داد که این آیزوفرم ها متعلق به زیر گروه i تیوردوکسین های h می باشند.