جداسازی و شناسایی یک باکتری گرمادوست تولیدکننده آنزیم آمیلاز و مطالعه بر روی ویژگیهای بیوشیمیایی آنزیم تولیدشده
چکیده
آنزیم آمیلاز در حال حاضر حدود 25% از بازار مصرف جهان را تشکیل میدهد. این آنزیم در صنایع مختلف از جمله دارویی، نساجی و نانوایی کاربرد دارد. باکتری های گرمادوست قادرند در دماهای بالارشد و فعالیت کنند. برخی از این باکتریها قادر به تولید آنزیم آمیلاز با فعالیت و پایداری در دمای بالا می باشند که در صنایع از اهمیت بالایی برخوردار می باشد. در این مطالعه باکتری گرمادوست تولید کننده آنزیم آمیلاز ار خاکهای اطراف تهران جدا گردید. کشت این باکتری در محیط شامل1% نشاسته، %0/1 k2hpo4 ،0/25na2hpo4 ، 0/2 (nh4)2so4،1/0 nacl، mg so4 7h2o05/0،cacl2 0/05 و tripton 0/2صورت گرفت و میزان تولید آنزیم در دما و ph های متفاوت بررسی گردید. بیشترین میزان تولید آنزیم توسط باکتری uml150 در دمای ℃48 وph 9 اتفاق افتاد. به منظور شناسایی این باکتری، با استفاده از آغازگرهای پیش برنده و معکوس، ژن 16s rdna ریبوزومی این باکتری تکثیر و تعیین توالی شد. نتایج بیانگر بیشترین شباهت این باکتری با باکتری bacillus licheniformis بودند. با بررسی فعالیت و پایداری آنزیم در دامنه دمایی 40تا80 درجه سانتیگراد بهینه فعالیت آنزیم در دمای 40 درجه سانتیگراد بدست آمد. همچنین این آنزیم بعلت حفظ فعالیت خود به میزان 78% در دمای℃80، واجد ارزش زیادی در صنایع از جمله صنعت قند سازی می باشد. همچنین به منظور انتقال ژن آمیلاز به e.coli از وکتور ptrc99a استفاده گردیدو پس از انتقال، بیان آن در e.coli مورد تایید قرار گرفت.