پایان‌نامه

استفاده از فناوری antisense rna در بهینه سازی بیان اینترفرون بتا نوترکیب در باکتری e.coli

ناهید بختیاری

دانلود متن کاملرایگان، با حساب کاربری؛ ثبت نام با گوگل چند ثانیه است

چکیده

یکی از مشکلات استفاده از باکتری اشرشیاکلی برای تولید انبوه پروتئین نوترکیب، ترشح استات در محیط کشت است که سبب کاهش طول عمر باکتری و به دنبال آن کاهش بیان پروتئین نوترکیب می شود. در این رساله ما از فناوری rnaی آنتی سنس به عنوان ابزاری سودمند در مهندسی متابولیک برای مهار جزئی بیان ژن های مربوط به دو آنزیم اصلی مسیر استات، یعنی فسفوترانس استیلاز (pta) و استات کیناز (ack)، استفاده کردیم. یک پلاسمید نوترکیب که حاوی ژن های آنتی سنسی است که هر دو ژن acka و pta را مورد هدف قرار می دهد، ساخته شد و اثرات آن بر مسیر استات و تولید پروتئین نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی bl21 (de3) دارای کاست آنتی سنس و فاقد آن مورد مطالعه و مقایسه قرار گرفت. اینترفرون بتای نوترکیب به عنوان پروتئین مرجع انتخاب شده و بیان ژن های آنتی سنس با استفاده از پروموتر قوی t7 و پروموتر طبیعی ژن acka که پروموتری ضعیف می باشد، کنترل شد. در طی این پژوهش ما دریافتیم که کاست آنتی سنس، تحت بیان پروموتر طبیعی ژن acka، سطح mrnaی ژن های مورد هدف را به طور جزئی کاهش داده و باعث کاهش ترشح استات در محیط کشت می شود. آنچه مورد توجه می باشد این است که در این حالت، با این که میزان کاهش استات چشمگیر نبود، میزان بیان اینترفرون بتا در باکتری دارای کاست نسبت به گونه ی کنترل 2/4-6/3 برابر افزایش نشان می داد. در صورتی که وقتی میزان استات تحت تاثیر پروموتر قوی t7 کاهش قابل توجه از خود نشان می داد، باکتری ها سریعتر دچار مرگ می شدند. این موضوع نشان می دهد که نسبت به آنچه در گزارش های قبلی وجود دارد، مسیر استات دارای اثرات حیاتی تری در فیزیولوژی سلولی می باشد. وقتی آزمایش ها تحت تنظیم پروموتر طبیعی ژن acka در محیط کشت با مقیاس بالاتر انجام شد، افزایش رشد و طول عمر باکتری هم بیشتر شده و این نتایج بیانگر این است که، این فناوری می تواند با موفقیت در مقیاس صنعتی تولید پروتئین نوترکیب در باکتری اشرشیاکلی هم به کار گرفته و ارزیابی شود.

اساتید راهنما و مشاور

نادر مقصودی، ولی الله بابایی پور

پایان‌نامه‌های مشابه

اسناد مشابه

  • بهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتئین نوترکیب بتا دیفنسین ۲ نوتروفیل‎های گاو

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی شهرکردنفیسه کریمی، nafiseh karimi genetic dept., shahrekord university, shahrekord, i.r. iran;گروه ژنتیک، دانشگاه شهرکرد، شهرکرد، ایران بهناز صفار، behnaz saffar genetic dept., shahrekord university, shahrekord, i.r. iran. tel: 00983814424419,: شهرکرد، دانشگاه شهرکرد، گروه ژنتیک، تلفن: 03814424419 کامران قائدی، kamran ghaedi biology dept., isfahan university, isfahan, i.r. iran.گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران. محسن مبینی دهکردی

    زمینه و هدف: دیفنسین‎ها یکی از بزرگ‎ترین خانواده‎ی پپتید‎های ضد میکروب می‎باشند که به واسطه‎ی فعالیت بر علیه باکتری‎ها، قارچ‎ها و بسیاری از ویروس‎ها به عنوان آنتی‎بیوتیک‎های نسل جدید منفعت بسیاری دارند. هدف از این مطالعه بهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتئین بتا

  • بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (pal) باکتری لژیونلا پنوموفیلا

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی شهرکردابوالفضل قلی پور، abolfazl gholipour 1medical plants research center and microbiology dept, shahrekord university of medical sciences, shahrekord, i.r.iran;مرکز تحقیقات گیاهان دارویی و گروه میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی شهرکرد، شهرکرد، ایران سید مجتبی موسویان، seyedmojtaba moosavian 2infectious diseases and tropical research center and microbiology dept, joundishapour university of medical sciences, ahvaz, i.r.iran2مرکز تحقیقات عفونی گرمسیری و گروه میکروبیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور، اهواز، ایران حمید گله داری، hamid galehdari 3genetics dept, shahid chamran university, ahvaz, i.r.iran;گروه ژنتیک، دانشگاه شهید چمران، اهواز، ایران؛ 4گروه فیزیولوژی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور، اهواز، ایران منوچهر مکوندی

    زمینه و هدف: اکثر تست های موجود برای تشخیص پنومونی لژیونلایی، با مشکلات زیادی از جمله حساسیت و ویژگی پائین و عدم توانایی در فراهم نمودن نتیجه در یک زمان کلینیکی مناسب مواجه هستند. از آنجایی که لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان ( pal ) لژیونلا پنوموفیلا در درون ادرار ترشح شده و به

  • بهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتئین نوترکیب بتا دیفنسین 2 نوتروفیل‎های گاو

    مقاله۲۰۱۳مجله دانشگاه علوم پزشکی شهرکردمبینی دهکردی, محسن، صفار, بهناز، قائدی, کامران، کریمی, نفیسه

    زمینه و هدف: دیفنسین‎ها یکی از بزرگ‎ترین خانواده‎ی پپتید‎های ضد میکروب می‎باشند که به واسطه‎ی فعالیت بر علیه باکتری‎ها، قارچ‎ها و بسیاری از ویروس‎ها به عنوان آنتی‎بیوتیک‎های نسل جدید منفعت بسیاری دارند. هدف از این مطالعه بهینه سازی بیان، تخلیص و بررسی خاصیت ضد میکروبی پروتئین بتا

  • بهینه سازی بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان (PAL) باکتری لژیونلا پنوموفیلا

    مقاله۲۰۱۲مجله دانشگاه علوم پزشکی شهرکردایمانی, رضا، الوندی, امیر هوشنگ، رجبی معماری, حمید، سلیمانی, ندا

    زمینه و هدف: اکثر تست های موجود برای تشخیص پنومونی لژیونلایی، با مشکلات زیادی از جمله حساسیت و ویژگی پائین و عدم توانایی در فراهم نمودن نتیجه در یک زمان کلینیکی مناسب مواجه هستند. از آنجایی که لیپوپروتئین مرتبط با پپتیدوگلیکان ( PAL ) لژیونلا پنوموفیلا در درون ادرار ترشح شده و به

  • بهینه سازی بیان آنزیم سلوبیوهیدرولاز cel6B در باکتری E. coli BL21(DE3)

    مقاله۲۰۲۱ژنتیک نوینفهیمه حیدری قره سو، نسرین مشتاقی، براتعلی مشکانی، سعید ملکزاده شفارودی

    مصرف انرژی و تاثیر آن بر محیط‌زیست یکی از بزرگترین چالش‌های بشر است و تولید اتانول زیستی یا سایر مواد شیمیایی به وسیله هیدرولیز آنزیمی سلولز می‌تواند تاثیر مهمی در جایگزینی سوختهای فسیلی و کاهش تولید CO2 در اتمسفر داشته باشد. آنزیم Cel6B از باکتری گرمادوست Thermobifidia fusca، یک

  • بهینه سازی بیان سم شقایق دریایی (فراگاسیاتوکسین c) در باکتری e.coli سویه bl۲۱

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی مازندرانبابک عبدی، babak abdi msc student in biochemistry, department of biology, faculty of science, urmia university, urmia, iran رشید جامعی، rashid jamei associate professor, department of biology, faculty of science, urmia university, urmia, iranدانشیار بیوشیمی، گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران مهدی ایمانی، mehdi imani assistant professor, department of basic sciences, faculty of veterinary medicine, urmia university, urmia, iranارومیه: کیلومتر 11 جاده سرو، دانشگاه ارومیه، دانشکده دامپزشکی

    سابقه و هدف: شقایق دریایی از جنس اکتینیا در مناطق جزری سواحل صخره ای شمال اسپانیا بسیار متداول است. اکتینیا فراگاسیا یکی از گونه های مهم است که پروتئین سمی فراگاسیاتوکسین c را جهت دفاع و شکار ترشح می کند. هدف اصلی از این مطالعه، انتقال پلاسمید حاوی ژن کدکننده فراگاسیاتوکسین c به