جداسازی راه اندازهای اختصاصی ژن های زئین بذر ذرت
چکیده
علیرغم اینکه همه سلول های یک موجود زنده دارای ژنوم یکسانی هستند، تمایز سلول ها، تشکیل بافتهای مختلف و تداوم عمل آنها نیازمند بیان اختصاصی برخی ژن ها در بافتها و شرایط مختلف است؛ راه اندازهای ژنی یکی از اصلی ترین وظایف را در این مورد برعهده دارند. با توجه به اهمیت ذرت به عنوان یک گیاه زراعی و یک گونه مدل مهم در مطالعات ژنتیکی، جداسازی بخش راه اندازی ژن های آلفا-زئین به عنوان راه اندازهای اختصاصی بذر، در این تحقیق هدف گیری شد. این راه اندازها چه در تولید پروتئین های نوترکیب و چه در تغییر کیفیت و خصوصیات بذر/دانه ذرت می توانند حائز اهمیت باشند. به منظور جداسازی این راه اندازهای اختصاصی ، ابتدا اطلاعات موجود در پایگاه داده های نوکلئوتیدی، جمع آوری شده، سپس اقدام به طراحی آغازگرهای اختصاصی از توالی های مرتبط گردید و از آنها برای تکثیر راه اندازها توسط واکنش زنجیره ای پلیمراز استفاده شد. برای تهیه ماده آزمایشی گیاهی، بذور دو رقم 704 و ذرت شیرین در شرایط گلخانه ای کشت شده و با استفاده از روش ctab از گیاهان دو برگی dna کل استخراج شد. پس از ارزیابی محصولات تکثیری و استخراج آنها از ژل، اقدام به همسانه سازی آنها در ناقل pgem-t easy vector گردید. سپس باکتری های سویه dh5? با استفاده از روش tss مستعد شده و با محصول واکنش اتصال تراریخت شدند. برای گزینش کلنی های موردنظر از آمپی سیلین و تست آبی- سفید در حضور x-gal و iptg استفاده شد. حضور قطعه مورد نظر در پلاسمید نیز توسط واکنش زنجیره ای پلیمراز کلنی ها و برش آنزیمی تأیید شد. پس از توالی یابی، نتایج بدست آمده با اطلاعات موجود در شبکه مقایسه شده و تفاوت ها و شباهت های آنها مشخص گردید.