تهیه سازه rnai ژن های fatb و fad2 کلزا و انتقال آن به آگروباکتریوم
چکیده
با توجه به یافته های جدید در زمینه اهمیت روغن در تغذیه انسان و نیز موارد صنعتی کاربرد آن، گیاهان روغنی به عنوان یکی از منابع عمده تامین کننده روغن، مورد توجه محققین قرار گرفته است. سطح زیر کشت کلزا به عنوان یک گیاه روغنی در کشور به ویژه در سال های اخیر در حال گسترش بوده است با توجه به این امر بهبود کیفیت روغن حاصل، از طرق مختلف از جمله دستکاری ژنتیکی گیاه، نیز بایستی مورد توجه قرار بگیرد. تحقیق حاضر در راستای امر فوق، به عنوان گام موثر در بهبود کیفیت روغن کلزا انجام گرفته است. بدین صورت که ابتدا از طریق بانک های اطلاعاتی dna، توالی ژن هایfad2 و fatb درگیر در سنتز اسیدهای چرب در کلزا و گیاهان مشابه مورد بررسی قرار گرفت و برای تکثیر اختصاصی آن ها آغازگرهای مورد نیاز با استفاده از نرم افزار پرایمر- بلاست طراحی و برای سنتز سفارش داده شد. به منظور تکثیر قطعات ژنی از دستگاه ترمال سایکلر استفاده گردید. قطعات تکثیر یافته با روش pcr پس از خالص سازی از ژل آگارز با وکتور pgemt-easy اتصال و بعد از همسانه سازی توسط باکتری e. coli ، توالی یابی گردید و پس از اطمینان از توالی همسانه سازی شده، اقدام به همسانه سازی این قطعات در یک وکتور دوگانه بعنوان سازه rnai گردید و در نهایت پس از تایید قطعات مورد هدف، آگروباکتریوم حاوی سازه rnai با روش ذوب و انجماد تهیه گردید که سازه مذکور شامل رشته سنس و آنتی سنس قطعات fatb و fad2 تحت راه انداز 35s و پایان دهنده nos می باشد ؛ که گام موثری در جهت تولید گیاه کلزا با محتوای اسیداولئیک بالا در تحقیقات آینده محسوب می-گردد