تهیه نانوبادی های نوترکیب مشتق شده از آنتی بادی های زنجیره سنگین شتری بر علیه لیپوپلی ساکارید باکتری ویبریو کلرا
چکیده
شتر ها قادر به تولید آنتی بادی هایی فاقد زنجیره سبک می باشند و قطعات حاصل از انتهای آمین این آنتی بادی ها vhh یا نانوبادی نام داشته و دارای توانایی کامل اتصال به آنتی ژن می باشند. برخی از مزایای نانوبادی ها قابلیت تولید آسان و انبوه آن ها در میکروارگانیسم ها و توانایی استفاده از آن ها در سیستم هایی از قبیل نمایش فاژی، مخمری یا ریبوزومی می باشد. هدف این پژوهش تهیه نانوبادی هایی با قابلیت اتصال به لیپوپلی ساکارید باکتری ویبریو کلرا اینابا o1 با استفاده از سیستم نمایش فاژی می باشد. به این منظور پس از جداسازی لنفوسیت ها از خون شتر غیر ایمن، rna تخلیص و با استفاده از پرایمر های oligo dt بهcdna تبدیل شدند. قطعات کد کننده vhh توسط nested pcr تکثیر شده و پس از هضم توسط آنزیم اندونوکلئاز sfii به فاژمید pcomb3x الحاق شدند. فاژمید های نوترکیب با استفاده از الکتروپوریشن به باکتری e.coli tg-1 منتقل گردیده و جهت آزادسازی آن ها هنگامی که od600 به 7/0 رسید توسط فاژ های کمکی m13k07 آلوده شدند. فاژ های مورد نظر توسط panning با استفاده از لیپوپلی ساکارید باکتری ویبریو کلرا اینابا o1 به عنوان آنتی ژن جدا شدند. پس از انتقال آنتی بادی جدا شده به فاز محلول، قابلیت اتصال، اختصاصیت و تمایل آن به آنتی ژن مورد نظر و همچنین باکتری ویبریو کلرا اینابا o1 توسط لکه گذاری وسترن و الایزا مورد بررسی قرار گرفت. نتایج بدست آمده بیانگر اتصال اختصاصی این آنتی بادی به لیپوپلی ساکارید باکتری ویبریو کلرا اینابا o1 و همچنین باکتری ویبریو کلرا اینابا o1 بود.