ترانسفورماسیون برنج به روش کشت جنین بالغ با استفاده از اگروباکتریوم
چکیده
برنج سهم عمده ای در تامین منبع غذایی، تولید انرژی و تجارت بین المللی دارد. ثابت ماندن میزان عملکرد ارقام اصلاح شده به روش های متداول اصلاحی در طی دهه های گذشته، اصلاح گیاهان را به روش های نوین اصلاح و آزمایشگاهی سوق داده است که دست کاری ژنتیکی گیاهان از جمله ی این روش های نوین اصلاح گیاهان می باشد. اگروباکتریوم ابزاری وام گرفته از طبیعت است که برای دست کاری ژنتیکی گیاهان به وفور استفاده می شود. ترانسفورم به واسطه ی اگروباکتریوم اغلب بر روی بافت کالوس انجام می شود و پس از آن کالوس به گیاه کامل باززایی می شود. بنابراین پیش از تصمیم به ترانسفورم، گیاه مورد نظر باید دستورعمل کالوس زایی و باززایی مناسبی داشته باشد. در این پژوهش چهار رقم برنج بومی هاشمی، گرده، حسنی و غریب به روش کشت جنین بالغ با استفاده از اگروباکتریوم ترانسفورم شد. از آن جا که این چهار رقم دستورعمل کالوس زایی و باززایی روشنی نداشتند، بررسی فرآیندهای کشت بافت آن ها هدف اصلی این پژوهش (ترانسفورماسیون) را تحت تاثیر قرار داد و موجب کند شدن روند برنامه ریزی شده ی پژوهش شد. برای سه محیط کشت کالوس زایی، باززایی، و ریشه زایی از محیط پایه ms، و به ترتیب تیمارهای هورمونی mg/l0.4 = baو mg/l 4 = 2,4-d؛ naa، kn و ba هر یک به میزان mg/l 1؛ و بدون هورمون استفاده شد. به منظور ترانسفورماسیون، سوش اگروباکتریوم eha105 واجد پلازمید pcambia1105.1r پس از سه روز کشت در محیط های مایع lb، ab، و induction (حاوی µm 100 استوسرینگون)، برای سه روز در محیط کشت کالوس زایی حاوی µm 100 استوسرینگون با کالوس های سپرچه ای برنج کشت همراه شد. در نتیجه ی این پژوهش، رقم غریب و هاشمی مناسب ترین رقم، و رقم گرده و حسنی نامناسب ترین رقم به-منظور کالوس زایی، باززایی و ترانسفورماسیون معرفی شدند. نتایج حاصل از این پژوهش برای تحقیقات آتیِ ترانسفورماسیون برنج مفید خواهند بود. در این نوشته تا حد توان و نیاز سعی شد که مفاهیم، روش ها و نتایج به طور دقیق و صریح بیان شوند.