تثبیت آنزیم آلفا آمیلاز باسیلوس لکنی فورمیس بر سطح اسپور باسیلوس سوبتیلیس به روش غیر ژنتیکی
چکیده
مزایای چشمگیر آنزیم های تثبیت شده از قبیل پایداری بیشتر آنزیم ،امکان استفاده چند باره از یک منبع آنزیمی و جداسازی آسان آن از مخلوط واکنش، سبب جلب توجه محققان در جهت گسترش روشهای تثبیت و استفاده از آنزیم های تثبیت شده گشته است. آنزیم آلفا آمیلاز یکی از پر کاربردترین آنزیم های صنعتی است که در صنایع مختلف، از جمله صنایع غذایی، نساجی،کاغذ سازی و تخمیری کاربرد دارد و تا کنون بر روی سطوح مختلف و با روش های متفاوت تثبیت شده است که هر یک از آنها مزایا و معایبی را به همراه داشته است. در پژوهش حاضر، آنزیم آلفا آمیلاز برای اولین بار به صورت غیر ژنتیکی و به دو روش برگشت پذیر و برگشت ناپذیر بر روی سطح اسپور باسیلوس سوبتیلیس تثبیت شده است. در روش برگشت پذیر آنزیم آلفا-آمیلاز از طریق میانکنش های الکترواستاتیک و هیدروفوبیک به صورت جذب سطحی بر روی سطح اسپور تثبیت شد و در روش برگشت ناپذیر، آنزیم با استفاده از n هیدروکسی سوکسین آمید و اتیل دی متیل آمینو پروپیل به صورت کوالان به سطح اسپور تثبیت شد. سپس ویژگی های کاتالیتیک آنزیم آزاد با آنزیم های تثبیت شده مورد بررسی و مقایسه قرار گرفت. میزان آنزیم تثبیت شده به روش جذب سطحی 22/21 درصد و برای آنزیم تثبیت شده به روش کوالان 5/94 درصد مشاهده شد. ph بهینه فعالیت آنزیم آزاد برابر با 6 و ph بهینه فعالیت آنزیم تثبیت شده برابر با 8 بود. فعالیت آنزیم آزاد u/l 5/6073 و فعالیت آنزیم تثبیت شده به روش جذب سطحی و کوالان به ترتیب u/l 1728 و u/l 2134 به دست آمد. دمای بهینه فعالیت آنها بدون تغییر و در هر دو حالت 60 درجه سانتی گراد است اما آنزیم تثبیت شده به روش کوالان فعالیت بهتری نشان می دهد. آنزیم تثبیت شده به روش کوالان پس از 10 سیکل استفاده 68% فعالیت خود را حفظ می کند