تثبیت آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز بر سطح اسپور باکتری باسیلوس سوبتیلیس به روش جذب سطحی

soudeh khanamani falahati-pour، phd. student in national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb), department of industrial and environmental biotechnology, tehran. abbas sahebghadam lotfi، professor in department of clinical biochemistry, faculty of medical sciences, tarbiat modares university, tehran, gholamreza ahmadian، assistant professor in national institute of genetic engineering and biotechnology (nigeb), department of industrial and environmental biotechnology, tehran amin baghizadeh، associated professor in department of biotechnology, institute of science and high technology and environmental sciences, graduate university of advanced technology, kerman

چکیده

هدف: ترکیبات ارگانوفسفره به وفور در آفت کش ها و عوامل عصبی شیمیایی استفاده شده است. آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز یک پروتئین همودایمر است که اولین بار از باکتری سودوموناس دیمینوتا و فلاوباکتریوم جدا شده است. این آنزیم قادر به تجزیه گستره وسیعی از ترکیبات ارگانوفسفره سمی است. استفاده از فرم تثبیت شده این آنزیم در مقابل فرم آزاد آن باعث افزایش پایداری آنزیم می­شود و قیمت آن را به واسطه امکان بازیافت و استفاده مجدد از آن کاهش می دهد. همچنین با تثبیت آنزیم امکان جداسازی آسان و سریع آن از محیط واکنش نیز فراهم می شود. مواد و روش ها: در این مطالعه ژن کد کننده آنزیم نوترکیب ارگانوفسفر هیدرولاز در ناقل بیانی (+)26b -pet کلون شد و در میزبان اشرشیاکلی(e. coli)bl21 (de3) plyss بیان و به داخل محیط کشت باکتری ترشح شد. سپس آنزیم خالص سازی و برای اولین بار روی سطح اسپور باکتری باسیلوس سوبتیلیس به روش جذب سطحی تثبیت شد. نتایج: نتایج این مطالعه نشان داد که تقریباً حدود 42 تا 45 درصد فعالیت آنزیم ارگانوفسفر هیدرولاز در ارتباط با اسپور ها مشاهده شد و در ph و دمای بهینه فعالیت آنزیم با جذب روی اسپور تغییری حاصل نشد اما پایداری آنزیم متصل به اسپور در دما و ph های بالا بیشتر از فرم آزاد آنزیم بود. نتیجه گیری: با توجه به امنیت اسپور باکتری باسیلوس سوبتیلیس برای انسان و محیط زیست از این سیستم می توان به عنوان یک تجزیه گر زیستی دوستدار محیط زیست برای تجزیه ترکیبات ارگانوفسفره با کارآیی بالا استفاده نمود.