بررسی ایمنی زایی زیر واحد ساختاری فاکتور اتصالcs6 ازباکتریetec
چکیده
اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک (etec) علت اصلی اسهال درکودکان زیر 5 سال در کشورهای در حال توسعه و همچنین عامل مهم اسهال مسافرتی می باشد. بنا براین طراحی و تولید واکسن بر علیه این بیماری از اهداف سازمان جهانی بهداشت می‌باشد. انتروتوکسین و فاکتورهای کلونیزاسیون دونوع از فاکتورهای اصلی ویرولانس etec هستند که فاکتورهای کلونیزاسیون، برای اتصال به سلولهای اپیتلیال روده ضروریاند. از شایعترین فاکتورهای کلونیزاسیون میتوان به cs6 اشاره نمود. cs6 از دو زیر واحد ساختاری cssa وcssb تشکیل شده است که در اتصال باکتری به سلول های روده نقشی اساسی دارند. از جهتی، نیمی از اشرشیاکلیهای انتروتوکسیژنیک بیان کننده انتروتوکسین حساس به حرارت(lt) هستند. طراحی و تولید واکسن های بر علیهetec بر اساس دو راهکار جلوگیری از اتصال به سلولهای روده و جلوگیری از فعالیت توکسین است. بنابراین در این مطالعه یک پروتئین نوترکیب متشکل از زیر واحد های cssa وcssb و blt به عنوان کاندیدای واکسن طراحی شد. اطلاعات این 3 ژن از بانک ژن استخراج و به وسیله لینکر، یک ساختار کایمر سه تایی ایجاد شد. توالی کد کننده با استفاده از ترجیح کدونی در ecoli طراحی شد. سپس در وکتور puc57سنتز ودر وکتور بیانی pet28a زیرهمسانه سازی و بیان شد. صحت پروتئین نوترکیب به وسیله آزمایش وسترن بلات تایید و پروتئین با ستون کروماتوگرافی تمایلی تخلیص گشت. مطالعه ایمنی زایی پروتئین کایمر تخلیص شده در موش و خرگوش انجام شد. نتایج تست الایزا با سرم موش و خرگوش برای تعیین تولید آنتی بادی نشان دهنده تولید تیتر بالای آنتی بادی بود. همچنین پیش انکوبه کردن سلولهای روده ای caco-2 با سرم حیوانات مدل ایمن شده، اتصال باکتری را به این سلول ها تا حد قابل توجهی کاهش داد. کارایی آنتی بادی بر علیه lt نیز با تست سنجش لوپ ایلئال خرگوش تایید گشت.با توجه به نتایج به دست آمده، پروتئین کایمر نوترکیب میتواند به عنوان یک پروتئین ایمونوژن از اجزای مهم واکسن بر علیه etec باشد.