پایان‌نامه

کلونینگ و بیان نوع نوترکیب پروتئین np آنفولانزا

سمیه توکلی

دانلود متن کاملرایگان، با حساب کاربری؛ ثبت نام با گوگل چند ثانیه است

چکیده

در این تحقیق ژن np با استفاده از سایت www.encorbio.com/protocols/codon.htm به گونه ای طراحی شده است که حاوی نوکلئو تیدهای تغییر یافته مناسب میزبان ( e.coli) باشد. توالی ژن از طریق شرکت ندای فن سنتز گردید . ساب کلونینگ np در pet-22b: ابتدا ژن np و وکتور pet-22b با آنزیمهای noti و hindiii برش داده شده و ژن np از pge-vector خارج گردید.سپس وکتور و ژن فوق در واکنش ligation وارد گردیده و در e.coli سویه top 10 ترانسفورم گردیدند. کلونهای مختلف پس از استخراج پلاسمید با برش با آنزیمهای noti و hindiii و pcr برای داشتن اینسرت غربال گردیدند. بیان ژن np در e.coli : برای بیان ژن در e.coli ازسلول bl21 استفاده گردید. برای این منظور پلاسمید نوترکیب pet-22b/np در سلول bl21 ترانسفورم گردیده پس از کشت بیان پروتئین با افزودن iptg القا گردید. سلولها سپس در ساعات مختلف جمع آوری گردیده و بیان پروتئین از طریق الکتروفورز در ژل sds-page آنالیز گردید. وسترن بلاتینگ: پروتئین بیان شده در ژل sds-page الکتروفورز گردیده و با روش وسترن بلاتینگ به غشاء نیتروسلولز منتقل گردید. این غشا سپس با آنتی بادی پلی کلونال علیه his tag انتهای c پروتئین مجاور گردیده و واکنش با آنتی ژن موجود در غشا از طریق مجاور کردن آن با آنتی بادی ضد igg موش کونژوگه با پراکسیداز و سوبسترای dab مورد بررسی قرار گرفت. نتایج: ساب کلونینگ np در pet-22b: با توجه به پیش بینی جایگاههای برش آنزیمی، از برش آنزیمی ژن np / pge-vector و وکتور بیانی pet-22b با آنزیمهای noti و hindiii برای کلونینگ استفاده گردید. کلونهای حاوی اینسرت بوسیله هضم با آنزیمهای noti و hindiii شناسایی گردیدند. . با توجه به اینکه ژن np bp 1500می باشد، انتظار داریم در صورت کلونینگ صحیح قطعه ای حدود bp 1500 از پلاسمید جدا شود. برای اطمینان کامل از وجود np در پلاسمید pet-22b، ساختار pet 22b-np با pcr تائید گردید. بیان ژنnp در : e.coli برای بیان ژن np ویروس آنفولانزا ، سازه ژنی pet 22b-npدر سلول بیانی bl21 ترانسفورم گردیده پس از القا برای تولید پروتئین نوترکیب بررسی گردیده پس از القا برای تولید پروتئین نوترکیب بررسی گردید. نتایج آزمایش فوق نشان داد که سازه ژنی فوق قادر به ابراز میزان بالایی از پروتئین np است که بصورت باندی قوی در نمونه های پس از القا در ژل sds-page دیده می شود وسترن بلاتینگ: در این آزمایش واکنش بین آنتی بادی و آنتی ژن به صورت یک با ند 60 کیلو دالتونی مربوط به پروتئین np در نمونه القا شده با iptg پس از گذشت 5 ساعت از زمان القا ظاهر گردید که نمونه کنترل فاقد آن بود.

اساتید راهنما و مشاور

مژگان بنده پور

شکل‌ها (۳)

  • شکل، صفحه‌ی ۱
    صفحه‌ی ۱
  • شکل 1-1 - NP در حالات مختلف عملکردی: a(RNP b(پروتئین NP تازه سنتز شده c(پلیمر آزاد RNA-NP
    شکل 1-1 - NP در حالات مختلف عملکردی: a(RNP b(پروتئین NP تازه سنتز شده c(پلیمر آزاد RNA-NPصفحه‌ی ۱۵
  • شکل3-1 ) ساختارRNP ویروس آنفولانزا(7)
    شکل3-1 ) ساختارRNP ویروس آنفولانزا(7)صفحه‌ی ۱۷

شکل‌ها از متن کامل مقاله برداشته شده‌اند و حقوقشان از آنِ نویسندگان و ناشر است.

پایان‌نامه‌های مشابه

اسناد مشابه

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-۱ در سیستم بیانی پروکاریوتی

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی اراکسمیه کدخدایان، somayeh kadkhodayan department of biology, sciences and research branch, islamic azad university, tehran, iran.گروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران. شیوا ایرانی، shiva irani department of biology, science and research branch, islamic azad university, tehran, iranگروه زیست شناسی، واحد علوم و تحقیقات، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) سید مهدی سادات، seyed mehdi sadat department of hepatitis and aids, pasteur institute of iran, tehran, iran.بخش هپاتیت و ایدز، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران.سازمان اصلی تایید شده: دانشگاه آزاد اسلامی علوم و تحقیقات (islamic azad university science and research branch) فاطمه فتوحی

    زمینه و هدف: یکی از پروتئین های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتئین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه های 48 تا 60) از ویروس hiv

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون TSH انسانی (TSHβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن

    مقاله۲۰۱۷مجله دانشگاه علوم پزشکی مازندرانهادی محمد زاده، بهزاد خوانساری نژاد، عبدالرحیم صادقی، حمید ابطحی

    سابقه و هدف: اندازه گیری هورمون متحرک تیروئید (TSH) برای تشخیص و بررسی اختلالات تیروئیدی، بسیار مفید بوده و معمولا از آزمون های RIA و ELISA برای این منظور می شود. با توجه به اینکه زنجیره آلفا بین TSH و سه هورمون گلیکوپروتئینی LH, FSH و CG شباهت ساختمانی زیادی وجود دارد؛ بنابراین،

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب زیرواحد بتای هورمون tsh انسانی (tshβ) و ارزیابی آنتیژنیسیته آن

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی مازندرانهادی محمد زاده، hadi mohammadzade department of medical biotechnology, faculty of medicine, arak university of medical sciences, arak, iranگروه زیست فناوری پزشکی، دانشکده پزشکی، بهزاد خوانساری نژاد، behzad khansarinejad department of microbiology and immunology, faculty of medicine, arak university of medical sciences, arak, iranگروه میکروبشناسی و ایمنیشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران عبدالرحیم صادقی، abdolrahim sadeghi endocrinology and metabolism research center, department of biochemistry, school of medicine, arak university of medical sciences, arak, iranمرکز تحقیقات غدد و متابولیسم، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اراک، اراک، ایران حمید ابطحی

    سابقه و هدف: اندازه گیری هورمون متحرک تیروئید (tsh) برای تشخیص و بررسی اختلالات تیروئیدی، بسیار مفید بوده و معمولا از آزمون های ria و elisa برای این منظور می شود. با توجه به اینکه زنجیره آلفا بین tsh و سه هورمون گلیکوپروتئینی lh, fsh و cg شباهت ساختمانی زیادی وجود دارد؛ بنابراین،

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی

    مقالهمجله میکروب شناسی پزشکی ایرانفاطمه کرپی، fatemeh korpi department of microbiology, international branch of iran university of medical sciences, tehran, iranگروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایران ، تهران ، ایران. بهادر بهروز، bahador behrouz department of microbiology, tehran university of medical sciences, tehran, iranگروه میکروبشناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران ، ایران. محمد معتمدی فر، mohmmad motameifar department of bacteriology and virology, shiraz university of medical sciences, shiraz, iranگروه باکتری شناسی و ویروس شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران غلامرضا ایراجیان

    زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ها: ژن کد کننده پیلین (pila) از سویه pao1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله pcr جدا گردید

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین snap-۲۵

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی زنجانسید لطیف موسوی، sl mousavi شهرام نظریان، sh nazarian جعفر امانی، j amani رحیم سروری زنجانی

    چکیده زمینه و هدف: سم های عصبی کلستریدیوم آزادسازی نوروترانسمیترها را به وسیله ی پروتئولیز اختصاصی و انتخابی snap-25 ، سیناپتوبروین vamp و سینتاکسین، مهار می کنند. پروتئین snap-25 یکی از پروتئین های تشکیل دهنده ی مجموعه ی لنگراندازی (docking complex) در پایانه های عصبی است. این پ

  • کلونینگ، بیان و تخلیص پروتئین پیلین سودوموناس آئروژینوزا در میزبان پروکاریوتی

    مقاله۲۰۱۶مجله میکروب شناسی پزشکی ایرانایراجیان, غلامرضا، بهروز, بهادر، معتمدی فر, محمد، کرپی, فاطمه

    زمینه و اهداف: سویه های پاتوژن سودوموناس آئروژینوزا پیلی قطبی تولید می کند که برای تحرک، چسبندگی و تهاجم مورد نیاز است. هدف از این مطالعه تولید و تخلیص پروتئین نوترکیب پیلین می باشد. مواد و روش ‌ ها: ژن کد کننده پیلین (pilA) از سویه PAO1 سودوموناس آئروژینوزا با بوسیله PCR جدا گرد