پایان‌نامه

ساخت، کلونینگ و بیان آنتی بادی منوکلونال انسانی شده تراستوزومب بر علیه گیرنده عامل رشد اپیدرمی دو (her2/neu) به روش مهندسی آنتی بادی

سودابه اکبرزاده شعرباف

چکیده

تحقیق حاضر با هدف دستیابی به تک کلون های مولد طول کامل زنجیره های سبک و سنگین آنتی بادی منوکلونال داروئی تراستوزومب طی مراحل مختلفی صورت پذیرفت. در ابتدا توالی کدکننده طول کامل هر کدام از زنجیره های سبک و سنگین آنتی بادی با در نظر گرفتن توالی های مناسب برای آغاز و خاتمه رونویسی و ترجمه در ناقل یوکاریوتی طراحی و ساخته شد. سپس هر کدام از توالی ها در داخل ناقلین دوگانه poptivec-topo و pcdna 3.3 topo وارد شد. بعد از انجام مراحل همسانه سازی و انتخاب در میزبان پروکاریوتی، سازه هایی که توالی هر زنجیره را بطور کامل و در جهت درست دریافت کرده بودند، برای تراریختی در میزبان یوکاریوتی (cho dg44) استفاده شدند. تراریختی به روش لیپوفکشن صورت پذیرفت و در نهایت طی مراحل مختلف انتخاب، سلولهایی بدست آمدند که هر دو سازه حاوی ژن زنجیره سبک و سنگین را دریافت نموده بودند. در مرحله بعد انتخاب کلون ها در محیط نیمه جامد با هدف دستیابی به تک کلون های پایدار بیان کننده زنجیره سبک و سنگین آنتی بادی منوکلونال داروئی تراستوزومب صورت پذیرفت. در این مرحله از میان جمعیت تراریخت شده اولیه، هجده سازه بدست آمد که به ترتیب std 3-18, 20, 21 نام گذاری شدند. از طرف دیگر dna ی ژنومی مربوط به هر کدام از کلون ها استخراج شد و با استفاده از pcr چندگانه حضور ژن زنجیره های سبک و سنگین آنتی بادی مورد نظر در داخل ژنوم هر سازه به اثبات رسید. بدنبال این مرحله برای تایید بیان پروتئین اختصاصی از آزمون های sds-page و وسترن بلاتینگ استفاده شد. برای نمونه های سوپ سلولی بعد از تغلیظ، sds-page بر روی ژل 10% انجام پذیرفت و بدنبال آن نمونه ها بر روی غشا pvdf منتقل گردیدند. در اکثر نمونه های بدست آمده از سوپ سلولی، زنجیره سبک با وزن مولکولی kda 28 بصورت یک باند پهن مشاهده شد، در حالیکه باند مربوط به زنجیره سنگین خیلی قابل تمیز نبود. در این مرحله با توجه به اینکه ژن زنجیره سنگین همراه با ناقل poptivec و در کنار ژن dhfr، به داخل ژنوم سلولها وارد شده بود، امکان تکثیر ژنومی با متوترکسات برای ورود نسخه های بیشتری از ژن زنجیره سنگین به داخل ژنوم سلولها وجود داشت. به این ترتیب طی هفت مرحله تیمار سلولها با متوترکسات، سازه هایی بدست آمدند که میزان مساوی از هر دو ژن را بیان کرده و به داخل محیط کشت ترشح می نمودند. در ادامه میزان بیان گیرنده her2 بر روی انواع رده های سلولی بدست آمده از سرطانهای تخمدان و پستان با استفاده از روش های اختصاصی ایمنوسایتوشیمی و فلوسایتومتری و با استفاده از آنتی بادی تجاری هرسپتین و آنتی بادی مشابه تولیدی در این پژوهش مورد مطالعه قرار گرفت. در این میان رده های سلولی sk-br-3 و sk-ov-3 بیشترین توانائی را در اتصال به آنتی بادی های مورد نظر داشتند که نشانگر بیان بالای گیرنده مورد مطالعه بر روی سطح این سلولها می باشد. مقایسه نتایج نشان دهنده قدرت قابل توجه آنتی بادی تولیدی در اتصال به گیرنده هدف در مقایسه با نمونه تجاری هرسپتین می باشد.

اساتید راهنما و مشاور

باقر یخچالی، زرین مینوچهر

پایان‌نامه‌های مشابه

اسناد مشابه

  • تولید آنتی بادی پلی کلونال شتری علیه گیرنده ۲ فاکتور رشد سلول های آندوتلیال عروق و بررسی عملکرد آن

    مقالهپژوهش در پزشکیمهدی بهدانی، mahdi behdani department of molecular medicine, pasteur institute of iran, tehran, iranبخش پزشکی مولکولی، انستیتو پاستور ایران مرتضی کریمی پور، morteza karimipour department of molecular medicine, pasteur institute of iran, tehran, iranبخش پزشکی مولکولی، انستیتو پاستور ایران حسین خان احمد، hossein khanahmad shahreza department of bcg, research-production branch, pasteur institute of iran, tehran, iranبخش ب ث ژ، واحد تولیدی - تحقیقاتی انستیتو پاستور ایران نادر اسدزاده

    چکیده سابقه و هدف: بخشی از آنتی بادی های شتر فاقد زنجیره سبک هستند و ناحیه اتصال به آنتی ژن در این نوع از آنتی بادی ها تنها دارای یک دومین می باشد. یکی از پروتئین های درگیر در آنژیوژنز گیرنده 2 فاکتور رشد سلول های آندوتلیال عروق (vegfr-2) است که در تومورهای مختلف افزایش دارد و بر

  • ساخت کتابخانه ژنی آنتی بادی scfv انسانی بر پایه t vector علیه توکسین کزاز

    مقالهمجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولیحمیده روحانی نژاد، hamide rohaninej azad university, oloum tahghighatjalil.fallah@gmail.com جمیله نوروزی، jamileh norouzi azad university, oloum tahghighatدانشگاه آزاد اسلامی جلیل فلاح مهرآبادی، jalil fallah mehrabadi malek-ashtar university of technologyدانشگاه صنعتی مالک اشتر مهدی مهدوی

    سابقه و هدف: امروزه آنتی بادی ها در حوزه های تشخیص و درمان جایگاه ویژه ای را به خود اختصاص داده اند. در این میان، آنتی بادی های مونوکلونال کاملاً انسانی به دلیل عدم برانگیختن پاسخ ایمنی در بدن و کارایی بالا در درمان بیماری ها مورد توجه قرار گرفته اند. تحقیق پیش رو به منظور ساخت ک

  • بهینه سازی تولید یک آنتی بادی با اختصاصیت دوگانه علیه گیرنده ی لپتین و cd۴ انسانی و بررسی خواص آن

    مقالهمجله دانشکده پزشکی اصفهانلیلا ممجدی، کارشناس ارشد، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران سید حمید زرکش اصفهانی، دانشیار، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران محمد ربانی، دانشیار، گروه زیست شناسی، دانشکده ی علوم، دانشگاه اصفهان، اصفهان، ایران رحمان امام زاده

    مقدمه: نقص در لپتین و یا گیرنده ی آن، اثر محافظتی در ابتلا به بیماری های خودایمن دارد؛ اما از آن جایی که لپتین روی سلول های بسیاری دارای گیرنده است، مسدود کردن همه ی آن ها عواقبی را به دنبال خواهد داشت. بنا بر این، آنتاگونیست لپتین در فرم قطعه ای آنتی بادی با ویژگی دوگانه (tafv)

  • کلونینگ، بیان و بررسی فعالیت ایمونولوژیکی scfv حاصل از آنتی‏بادی منوکلونال موشی ضد پلاسمینوژن انسانی با توانایی افزایش فیبرینولیز

    مقالهپژوهش های سلولی و ملکولی

    امروزه آنتی بادیهای منوکلونال از پرمصرف ترین داروهای بیولوژیک هستند. اولین گام در این راستا ساخت قطعات آنتی بادی (scfv) است که مزیت آن در داشتن اندازه کوچک، پاکسازی (کلیرانس) سریع از خون و نفوذپذیری بهتر به بافتها است. آنتی بادی منوکلونال a1d12 که سبب افزایش هضم لخته می شود، کاند

  • همسانه‏سازی و بیان scfv از یک آنتی‏بادی منوکلونال ضد پلاسمینوژن انسانی

    مقالهزیست شناسی ایران

    رگزایی فرآیند ایجاد رگهای جدید از رگهای موجود است. رگهای جدید نیازهای متابولیک سلولها را تأمین می‏نمایند. رگزایی در بسیاری از پدیده‏های فیزیولوژیک و پاتولوژیک اهمیت فراوانی دارد. طی فرآیند رگزایی پروتئینازها به ویژه پلاسمین، ماتریکس خارج سلولی را تخریب می‏کند و سبب فعال شدن و آزا

  • کلونینگ و بیان دومین انتهای آمینی فلاژلین پسودوموناس آئروژینوزا و ارزیابی آنتی بادی های تولید شده بر علیه آن در مهار حرکت پسودوموناس آئروژینوزا

    مقالهمجله دانشگاه علوم پزشکی زنجانفریده دکتر زاده، f dakterzada اشرف محبتی مبارز، a mohabati mobarez مهریار حبیبی رود کنار، m habibi roudkenar مهدی فروزنده مقدم

    چکیده زمینه و هدف: پسودوموناس آئروژینوزا یک باکتری بیماری زای فرصت طلب است. این باکتری عفونت های شدید و کشنده در افرادی که ایمنی سرکوب شده دارند، ایجاد می کند. باکتری دارای یک فلاژل قطبی است. فلاژل و فلاژلین، زیر واحد ساختاری فلاژل، نقش مهمی در بیماری زایی پسودوموناس آئروژینوزا ب