تولید پروتئین نوترکیب نوکلئوکپسید ویروس برونشیت عفونی طیور از طریق بیان ژن در e.coli
چکیده
برونشیت عفونی یکی از مهم ترین بیماری¬های ویروسی ماکیان است، که خسارات اقتصادی قابل توجهی به صنعت پرورش طیور در سرتا¬سر جهان وارد می¬کند. برونشیت عفونی یک بیماری تنفسی واگیر با حدت بالا ایجاد می¬کند. برخی سروتیپ¬های نفروتروپ ویروس برونشیت عفونی نفریت ایجاد می¬کنند. ویروس برونشیت عفونی مسئول کاهش تولید تخم و تولید تخم¬های غیر عادی است. بیماری برونشیت عفونی درمان ندارد و تنها راه پیشگیری در گله¬های طیور واکسیناسیون علیه ویروس برونشیت عفونی می¬باشد. ایمنی ضد برونشیت عفونی اکثرا به وسیله آزمایشات سرولوژیکی از جمله الایزا سنجیده می¬شود. ویروس برونشیت عفونی طیور (جنس کروناویروس، خانواده کروناویریده) دارای یک رشته rna مثبت به طول 27/6 کیلو¬باز می-باشد. ژنوم ویروس سه پروتئین ساختاری بزرگ را کد می¬کند: گلیکوپروتئین اسپایک، گلیکوپروتئین داخل غشایی و فسفوپروتئین نوکلئوکپسید با وزن 43 تا 50 کیلودالتون. هدف از این مطالعه تهیه فسفوپروتئین نوکلئوکپسید نوترکیب برای توسعه یک الایزای ارازن¬تر، ایمن¬تر و سریع¬تر است. برای این هدف بعد از استخراج rnaاز ویروس، ژن موردنظر با طول bp 1227 به وسیله rt-pcr تکثیر شد. سپس این ژن در یک پلاسمید بیانی ( pmal-c2x) کلون شد و پلاسمید نوترکیب به سویه rosetta باکتری e.coliمنتقل شد. بیان پروتئین نوکلئوکپسید به وسیله sds-page بررسی شد. بعد از خالص سازی پروتئین n به وسیله کروماتوگرافی ستون رزین-آمیلوز، پروتئین در آزمایش وسترن بلات و الایزا برای تفریق سرم¬های مثبت (دارای آنتی¬بادی ضد ویروس برونشیت عفونی) و منفی جوجه¬ها استفاده شد. پروتئین نوکلئوکپسید نوترکیب با موفقیت توانست 2 گروه سرم را در هر دو آزمایش تفکیک کند. نتایج این مطالعه پیشنهاد می¬کند که این پروتئین می-تواند به شکل موثری برای شناسایی آنتی¬بادی ویروس برونشیت عفونی به کار رود.