کشت آزمایشگاهی و بررسی بیان ژن های دخیل در فولیکوژنز در فولیکول های پیش آنترال مشتق شده از تخمدان های منجمد و ذوب شده موش ماده نابالغ با دو روش انجماد آهسته و شیشه ای
چکیده
امروزه انجماد بافت تخمدان به دو روش آهسته و شیشه¬ای صورت می¬گیرد، گرچه هنوز روش مناسب برای انجماد بافت تخمدان و تاثیر روش¬های انجمادی بر الگوی بیان ژن¬های بلوغ مورد سوال است. در این مطالعه ابتدا تخمدان¬ها از بدن موش سوری نابالغ خارج و به سه گروه کنترل، انجمادآهسته و شیشه¬ای تقسیم شدند. در گروه انجماد آهسته تخمدان¬ها با استفاده از دستگاه فریز برنامه¬ریزی شده، و در گروه انجماد شیشه ای تخمدان ها به روش niv منجمد شدند. موفولوژی بافت تخمدان در گروه های کنترل و انجمادی بعد از ذوب با استفاده از رنگ آمیزی هماتوکسیلین-ائوزین مورد ارزیابی قرار گرفت. فولیکول¬های پیش آنترال با روش مکانیکی از تخمدان¬های گروه کنترل و تخمدان¬های منجمد- ذوب شده گروه انجماد آهسته و شیشه¬ای جدا و به مدت 12 روز کشت داده شدند. میزان بقا 1، 8 و 12 روز پس از کشت و همچنین میزان بیان کمی ژن¬های بلوغ 1، 8 و 12 روز پس از کشت در هر سه گروه بررسی گردید. در نهایت میزان بلوغ تخمک¬های هر سه گروه نیز در روز 13 با یکدیگر مقایسه شد. . در بررسی های مورفولوژیک تمامیت و یکپارچگی بافت تخمدان در گروه های انجمادی بخوبی و مشابه گروه کنترل حفظ شده بود. در بررسی میزان بقای فولیکول¬ها طی روزهای مختلف کشت، گروه انجماد آهسته در روزهای 8 و 12 کشت بقای کمتری نسبت به گروه کنترل نشان داد (p<0.05)، گروه انجماد شیشه¬ای نیز نسبت به گروه کنترل و انجماد آهسته در تمامی روزهای کشت بقای کمتری نشان داد(p<0.05). بررسی میزان بلوغ تخمک ها نیز نشان داد که هیچ تفاوت معنی داری بین سه گروه مورد آزمایش وجود ندارد. در ارزیابی کمی بیان ژنی نیز در همه ژن¬های بلوغ به جز igf1، میزان بیان در گروه¬های انجمادی در روز 1 کشت بالاتر از کنترل بود، که این میزان در ژن bmp15 در هر دو گروه انجمادی و در ژن kit-l در گروه انجماد شیشه ای نسبت به کنترل به طور برجسته بیشتر بود (p<0.05). از نتایج بدست آمده می¬توان این طور نتیجه گیری کرد هرچند هر دو روش انجماد آهسته و شیشه¬ای بافت تخمدان بر بیان ژن¬های بلوغ تأثیر منفی نداشته، اما با توجه به میزان بقا بیشتر در گروه انجماد آهسته این روش مناسبت تر برای انجماد بافت تخمدان و حفظ ذخایر فولیکولی آن می¬باشد.