پایان‌نامه

کلونینگ و بیان ژن اوریکاز باکتری bacillus subtilis در سویه ی باکتریایی (bl21) e.coli

شیرین ابراهیمی

چکیده

آنزیم اورات اکسیداز یا اوریکاز (ec 1.7.3.4) آنزیمی است که اکسیداسیون آنزیمی اسیداوریک به آلانتوئین را کاتالیز می کند. امروزه از این آنزیم در درمان بیماری های مرتبط با هایپراوریسمی همچون نقرس، سندروم متابولیک، سندروم لیز توموری و ... استفاده می شود. بر این اساس هدف از بررسی حاضر کلونینگ و بیان ژن اوریکاز باسیلوس سابتیلیس در سویه ی باکتریایی e.coliمی باشد. ابتدا dna ژنومی باسیلوس سابتیلیس به روش ctab استخراج شد سپس ژنوم استخراج شده بر روی ژل آگارز 1% بررسی شد. واکنش pcr جهت تکثیر ژن اوریکاز با استفاده از پرایمرهای پیشرو و معکوس طراحی شده بر اساس توالی ژن اوریکاز باسیلوس سابتیلیس به دست آمده از بانک اطلاعات ژنی، انجام گرفت. طراحی پرایمر به صورتی انجام گرفت که در پرایمر معکوس جایگاه برش ncoi و در پرایمر پیش رو جایگاه xhoi وجود داشته باشد. بعد از تکثیر، محصول pcr توسط آنزیم های ncoi و xhoi هضم شد و به داخل پلاسمید pet28a کلون گردید. محصول لایگیشن با استفاده از روش شیمیایی به ترتیب در سه سویه ی باکتریایی dh5?، top10 وbl21 ترانسفورم شد. بعد از تایید کلونینگ، القای بیان ژن اوریکاز در bl21 توسط iptg انجام گرفت. نتایج نشان داد که تکثیر ژن اوریکاز باسیلوس سابتیلیس از طریق واکنش pcr با موفقیت انجام گرفته است. نتایج حاصل از چک کلونینگ نشان داد که ترانسفورماسیون در dh5? صورت نگرفته است، در top10 ژن اوریکاز به صورت ناقص ترانسفورم شده ولی ترانسفورماسیون در bl21 به درستی انجام گرفته ا ست. علاوه بر این ژن اوریکاز بین جایگاه برش ncoi و xhoi در pet28a با موفقیت کلون گردید. داده های حاصل از تعیین توالی نشان داد که ژن اوریکاز در فرودست پروموتور t7 و بدون تغییر در قالب خواندن، کلون شده است.

اساتید راهنما و مشاور

مهدی ایمانی، رشید جامعی

پایان‌نامه‌های مشابه

اسناد مشابه

  • اثر اصلاحی سویه های مختلف باکتری bacillus subtilis بر نفوذپذیری گونه کاج تدا (pinus taeda) در دو محیط کشت مختلف

    مقالهتحقیقات علوم چوب و کاغذ ایراناسماعیل زاهدی تجریشی، دانشجوی دکتری، گروه علوم صنایع چوب و کاغذ، دانشکده منابع طبیعی، دانشگاه تهران، کرج، ایران رضا اولادی، عضو هیات علمی گروه علوم و صنایع چوب و کاغذ دانشگاه تهران اصغر طارمیان، دانشیار، گروه علوم و صنایع چوب و کاغذ، دانشکده منابع طبیعی، دانشگاه تهران، کرج، ایران مسعود احمدزاده

    یکی از علت های اشباع پذیری کم چوب های جنس کاج، بسته شدن دریچه منافذ بین تراکئیدی (مکش منفذی)، طی خشک شدن در دامنه آب آزاد و یا مسدود شدن این منافذ در حین چوب درونی شدن است. در این پژوهش، برای باز کردن منافذ مسدود تراکئیدهای درون چوب گونه کاج تدا (pinus taeda)، از روش اصلاحی شیار

  • بیان آلبومین سرم انسانی نوترکیب در باکتری اشرشیا کلی سویه (DE3) BL21

    مقاله۲۰۱۳مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولیفاطمه غفاری، فرناز خیر اندیش، بهرام کاظمی، محمد داود غفاری

    سابقه وهدف: آلبومین سرم انسان از مهم ترین ترکیبات سیستم گردش خون می باشد . این پروتئین حامل بسیاری از هورمون ها ومتابولیت ها در بدن بوده و در تثبیت حجم خون و درمان انواع سوختگی ها مؤثر می باشد. چون تهیه آن از پلاسمای خون پرهزینه بوده و همراه با آلودگی به پاتوژن ها ی مختلف است، تو

  • بیان آلبومین سرم انسانی نوترکیب در باکتری اشرشیا کلی سویه (de۳) bl۲۱

    مقالهمجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولیفاطمه غفاری، fatemeh ghafari 1. biology group, science and research branch islamic azad university, tehran, iranگروه زیست شناسی ، دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم و تحقیقات، تهران- ایران فرناز خیر اندیش، farnaz kheirandish 2. departement of parasitology and mycology, school of medicine, lorestan university of medical sciences, khoramabad, iranگروه انگل شناسی و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی لرستان، دانشکده پزشکی، خرم آباد- ایران بهرام کاظمی، bahram kazemi cellular and molecular biology research center, shahid beheshti university of medical sciences,tehran,iran and biotechnology departement, school of medicine, shahid beheshti university of medical sciences,tehran,iranمرکز تحقیقات بیولوژی سلولی ومولکولی، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران- ایران محمد داود غفاری

    سابقه وهدف: آلبومین سرم انسان از مهم ترین ترکیبات سیستم گردش خون می باشد . این پروتئین حامل بسیاری از هورمون ها ومتابولیت ها در بدن بوده و در تثبیت حجم خون و درمان انواع سوختگی ها مؤثر می باشد. چون تهیه آن از پلاسمای خون پرهزینه بوده و همراه با آلودگی به پاتوژن ها ی مختلف است، تو

  • کلونینگ و بیان ژن کد کننده آنزیم لاکاز از باکتری باسیلوس آنتراسیس سویه qza2

    مقاله۲۰۱۵مجله پژوهش های سلولی و مولکولیپروین زمانی، محمدعلی آموزگار، خسرو خواجه

    لاکازها به دلیل توانایی اکسیداسیون طیف گسترده ای از ترکیبات فنولی کاربردهای بیوتکنولوژیکی گوناگونی دارند. در این مطالعه سویه بومی qza2 که از خاک های ایران جدا شده است مورد استفاده قرار گرفت. این سویه بر اساس توالی srrna 16دارای بیش ترین شباهت به باکتری باسیلوس آنتراسیس سویه atcc

  • کلونینگ و بیان ژن کد کننده آنزیم لاکاز از باکتری باسیلوس آنتراسیس سویه qza۲

    مقالهپژوهش های سلولی و ملکولیپروین زمانی، دانشگاه تهران محمدعلی آموزگار، دانشیار گروه میکروبیولوژی پردیس علوم، دانشکده زیست شناسی و قطب تبار زایی موجودات زنده، دانشگاه تهران، تهران، ایران خسرو خواجه، 3. دانشیار گروه بیوشیمی دانشکده علوم زیستی دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران

    لاکازها به دلیل توانایی اکسیداسیون طیف گسترده ای از ترکیبات فنولی کاربردهای بیوتکنولوژیکی گوناگونی دارند. در این مطالعه سویه بومی qza2 که از خاک های ایران جدا شده است مورد استفاده قرار گرفت. این سویه بر اساس توالی srrna 16دارای بیش ترین شباهت به باکتری باسیلوس آنتراسیس سویه atcc

  • کلونینگ و بیان ژن کد کننده آنزیم لاکاز از باکتری باسیلوس آنتراسیس سویه QZA2

    مقاله۲۰۱۵پژوهش های سلولی و مولکولیپروین زمانی، محمدعلی آموزگار، خسرو خواجه

    لاکازها به دلیل توانایی اکسیداسیون طیف گسترده‌ای از ترکیبات فنولی کاربردهای بیوتکنولوژیکی گوناگونی دارند. در این مطالعه سویه بومی QZA2 که از خاک‌های ایران جدا شده است مورد استفاده قرار گرفت. این سویه بر اساس توالی SrRNA 16دارای بیش‌ترین شباهت به باکتری باسیلوس آنتراسیس سویه ATCC