معتبرسازی روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (hplc ) جهت شناسایی و تعیین مقدار لیزینوآلانین در شیر خشک نوزادان
چکیده
سابقه و هدف: لیزینوآلانین طی تهیه و فرآوری شیر خشک در اثر حرارت، ph قلیایی با واکنش حذفی بتا، تشکیل دهیدروآلانین و واکنش با ترکیبات آمین دار ایجاد می گردد. در این مطالعه طراحی و معتبر سازی روشی مناسب جهت شناسایی و تعیین مقدار لیزینوآلانین در شیر خشک نوزادان با استفاده از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (hplc) مد نظر قرار گرفت. مواد و روش ها: در این پژوهش ابتدا شرایط بهینه hplc (ستون c18، آشکارساز فلورسانس، مشتق سازی توسط دنسیل کلراید، سرعت جریان فاز متحرک ml/min 9/0، شویش گرادیانت و فاز متحرک شامل بافر فسفات 7=ph و استونیتریل) تعیین شد. بر اساس شرایط فوق روش معتبر سازی گردید و کارآمدی روش معتبر شده با آنالیز 10 نمونه شیر خشک بررسی شد. یافته ها : نمودار کالیبراسیون در محدوده غلظتی 80- 5 میلی گرم بر لیتر، خطی بود. ضریب همبستگی 9949/0= r2 به دست آمد. حد تشخیص (limit of detection) mg/l2 و حد تعیین مقدار (limit of quantification)mg/l 5 و درصد بازیافت (recovery) 8/87 _ 7/83 درصد به دست آمد. در ارزیابی دقت روش، انحراف استاندارد نسبی (rsd%) سطح منحنی و غلظت به دست آمده محاسبه شد. برای intra day به ترتیب کمتر از 87/3 و 7/2 درصد و برای inter day به ترتیب کمتر از 2/5 و 4/7 درصد به دست آمد. در 7 مورد از شیرهای آنالیز شده، لیزینوآلانین شناسایی نشد و در 3 نمونه مقدار آن بینlod, loq به دست آمد. نتیجه گیری: این روش در جهت تشخیص و شناسایی لیزینوآلانین در شیرخشک نوزادان از دقت، صحت و کارایی لازم برخوردار بوده و در دسترس و مقرون به صرفه می باشد